Bgal
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Activité de la β-galactosidase-Méthodes de mesure de vitesses de réaction [P] = f (t)
Introduction
L'organisme est constitué de nombreuses protéines. Parmi celles-ci on distingue les enzymes, des catalyseurs biologiques intervenant dans les réactions biochimiques.
Comme leur nom l'indique, leur unique rôle est de catalyser une réaction c'est à dire de faciliter celle-ci sans modifier les produits formés. Une enzyme agit sur un substrat pour le transformer en un produit sans intervenir dans l'équilibre de la réaction. De plus, une des particularités des enzymes est de rester intacte au cours de la réaction ce qui lui confère la capacité de catalyser plusieurs réactions successives.
La β-galactosidase est une enzyme qui hydrolyse le lactose en glucose + galactose et qui a une spécificité large ce qui lui permet d'hydrolyser les β-galactosides tels que l'ONPG, également appelé le 2-nitroplényl-β-D-galactopyranoside, en galactose + ONP (ou 2-nitrophénol), un produit jaune en milieu alcalin et absorbant à 415nm.
La recherche de la β-galactosidase est utilisée en bactériologie afin d'identifier une bactérie.
En effet, la dégradation du lactose chez une bactérie peut être un caractère discriminant pour certaines espèces. La première β-galactosidase à avoir été séquencée est d'ailleurs celle d'une bactérie très connue : Escherichia coli.
Chez les humaines, cette enzyme diffère par sa séquence en acides aminés soit 677 acides aminés contre 1024 chez Escherichia coli.
Nous pouvons alors nous demander comment agissent ces enzymes et notamment à quelle vitesse agissent-elles ?
Le but de ce TP est d'étudier la vitesse initiale d'une réaction catalysée par la β-galactosidase en comparant deux techniques de détermination de vitesses différentes. La valeur de cette vitesse permet, par la suite, de déterminer la concentration du produit formé.
Matériel et Méthodes Matériel Pour les 2 méthodes, est nécessaire : Un tampon