Absorbance

réactionnel en fonction du temps de la réaction Quelle dilution allez-vous utiliser pour la suite? Quantité de pNp formée dans le milieu réactionnel en fonction du temps de réaction: Nous allons utiliser la dilution 25x car elle offre une absorbance élevée et car elle est linéaire. Calculer l’activité spécifique du l’enzyme (µM de pNp formé/min .mg PPase) pour les 3 dilutions. Dilutions | µL de PPase dans le milieu réactionnel | Quantité de PPase dans le milieu réactionnel

bain marie à 100 °C pendant 5 min exactement ; refroidir et ajouter 7,5 mL (QSP 10 mL) d'eau distillée dans chaque tube (on suppose que l'évaporation est la même pour chaque tube), homogénéiser et laisser reposer pendant 15 min. Lire les absorbances à 540 nm contre le blanc (tube no 0). Essais Ils sont à traiter dans les mêmes conditions opératoires. Réaliser le dosage avec des prises d'essais de 0,5 mL diluées convenablement, additionnées d'1 mL d'eau distilée et d'1 mL de DNS. Tableau

potentiel de la solution est : E = E0 + [Ox ] 0.059 log n [ Re d ] II . Une méthode non destructive : la spectrophotométrie a. Définitions Transmittanse T : Rapport du flux lumineux transmis I et flux lumineux incident I0 T = I/ I0 - Absorbance A : il s’agit du logarithme décimal de l’inverse de la transmettance T. Pour une radiation incidente monochromatique de longueur d’onde λ et d’intensité I0, I 1 l’absorbance est définie par : A = log( 0 ) = log( ) avec I intensité lumineuse

de couleur ? HO : :,= ^-=: a),':- ::--:3;:a , Jus:ifier que ces deux molécules puissent être responsabl=. de Ia couleur des cristaux. CiC ccn;uolées De Ia couleu ,é T CH ,CH La E HC-CH -/\/\ CH LC /,,,\/i j r rption de chacu r , absorbance A ,ÿ ., .i -r Des cristaux qui bronzent ! Lescristauxde2-(2,4-dinitrobenzyl)pyridine possèdent une coloration jaune pâle. Lorsqu,ils sont'exposés au soleil, leur couleur vire au bleu foncé rapidement. sente dans les cristaux est la molécule

proportionnelle à sa concentration en soluté. Ainsi, en reportant les absorbances mesurées pour les solutions S0 à S4 sur un graphique image: http://s1.lemde.fr/medias/web/1.2.671/img/evenementiel/bac/chimie-terminale-s/t_crde76_m35.png , les points de mesure sont alignés et forment une droite d'étalonnage. Cette droite permet de déterminer la concentration d'une solution de sulfate de cuivre à partir de la mesure de son absorbance. Détermination de la concentration de la solution S par étalonnage :

donné ci-dessous (doc 1). On souhaite vérifier la teneur en colorant E 124 d'un sirop de grenadine S dont l'étiquette indique : «  5 mg pour 100 mL » . Après avoir préparé une gamme de solutions étalons contenant ce colorant, on mesure leur absorbance A (doc 2). Doc 1 Doc 2 Solution S1 S2 S3 S4 S5 Concentration massique Cm en mg .L-1 2.0 4.0 6.0 8.0 10.0 A 0.29 0.55 0.88 1.18 1.43 1°) Quelle longueur d'onde a-t-il fallu sélectionner pour réaliser ces mesures ? Justifiez. 2°) a) Tracez le

Triethanolamine pH 9.48.25 ml8.25 ml8.25ml8.25ml8.25 ml9.5 ml 8.25 ml9.5 ml 8.25mlLaisser la coloration se développer pendant 10 minutes. Lire les absorbances au spectrophomètre à 510 nm en faisant le zéro d’absorbance avec : · le tube 1 pour la gamme étalon · le tube 6 pour le dosage dans l’extrait de thé vert · le tube 8 pour le dosage dans l’extrait de thé noir Calculer les teneurs en catéchines totales

 a. Calcul de la concentration de PO43- dans la solution d’analyse (faite à partir du détergent Sunlight) d’après son absorbance (A1) et calcul de son incertitude. A1 = m Canalyse + b ∆ Canalyse = Canalyse [(∆A1+∆b)/(A1-b) + ∆m/m] Canalyse = A1 – b ∆ Canalyse = 2,05335065x10-4 mol/L x m [(0,003 + 2,8283x10-3)/(0,261-3,571429x10-3)

nouvelle quantité de matière initiale d'acide oxalique. 3.6.2. En déduire le réactif limitant. 3.6.3. Quelle est l'absorbance finale ? 3.6. ANNEXE (À RENDRE AVEC LA COPIE) A 2,0 1,5 1,0 0,5 0 0 200 400 600 800 1000 1200 Courbe 1. Absorbance en fonction du temps: A = f(t) t (s) x (µmol) 20 15 10 5 0 0 200 400 600 800 1000 1200 t (s) Courbe 2. Avancement en fonction du temps: x = f(t) 

=>Calcule d’une pente voir (annexe 5) : Ordonné : - P1 Abscisse : => Absorbance corrigée exemple pour 20 µL BSA 0.1mg/ml : Abs corrigée 20 µL : 0.219-0.145=0.074 => Observation graphique µg protéines pour la fraction extrait 1/10  annexe 4: 5.3 µg =>Concentration protéique