Analyse D Une Electrophorese

γ)-réactif de Bradford 7- Électrophorèse a- Définition b- Principe c- Préparation du gel polyacrylamide SDS d- Les % utilisé lors du TP e- Les solutions a préparé α)-tampon d’échantillon β)-tampon d’électrophorèse γ)-gel de séparation λ)-gel de concentration V- traitement et analyse des résultats 1- Détermination des concentrations protéiques 2- Calcul du volume a prélevé 3- Dépôt sur puit 4- Analyse critique des volumes a prélevé 5- Migration

d’un échantillon témoin connu. Cela concerne l’analyse de constituants chimiques porteurs de charges électriques. Cette technique peut être utilisée pour « trier » deux types de molécules : des protéines, ou des fragments d'ADN. A) ELECTROPHORESE DES PROTEINES. Les protéines sont des molécules chargées électriquement, les acides aminés constitutifs comprenant des radicaux électronégatifs et électropositifs, leur donnant des propriétés variables selon qu’ils sont placés dans des

TP Séparation d’ADN par électrophorèse analytique et préparative I. But : Ce TP a pour but d’extraire l’ADN plasmidique pUC18-wzc à partir d’un culot d’E.coli, d’établir la carte de restriction du plasmide grâce à sa digestion par des enzymes et enfin d’isoler et purifier le fragment d’intérêt wzc dans pUC18-wzc. II. Principes : Pour mener à bien ce TP on utilise la technique d’électrophorèse sur gel d’agarose. Cette technique permettra la séparation des différents fragments obtenus par

d’ATP radioactif et de polynucléotide kinase. 2. Isolement du fragment d’ADN à séquencer. Celuici est séparé au moyen d’une électrophorèse sur un gel de polyacrylamide. Le fragment d’ADN est découpé du gel et récupéré par diffusion. 3. Séparation de brins: Les deux brins de chaque fragment d’ADN sont séparés par dénaturation thermique, puis purifiés par une nouvelle électrophorèse. 4. Modifications chimiques spécifiques: Les ADN simple-brin sont soumis à des réactions chimiques spécifiques des différents

59800 LILLE TUBE SEC OU TUBE SST GEL - CHIMIE : urée, créatinine, acide urique, bilirubine, calcium, magnésium sérique, fer (capacité), phosphore. cholestérol (total-HDL-LDL), triglycérides, apolipoprotéines A1 et B. - PROTIDES : électrophorèse, immunoélectrophorèse, cryoglobulines (37° IgG, IgA, IgM, haptoglobine, C), orosomucoïde, protéine C réactive (CRP), sidérophiline, ferritine, albumine… - ENZYMES : GOT, GPT, LDH, alpha HBDH, CPK, gamma GT, aldolase, 5'nucléotidase, phosphatases

Compte rendu TP électrophorèse de protéines électrotransfert et immunorévélation I) But du TP Lors du premier TP, nous avions essayé de purifier une protéine du blanc d’œuf, le lysozyme, par chromatographie échangeuse d’ions. Dans ce TP, nous allons vérifier cette purification à l’aide d’une électrophorèse sur gel de polyacrylamide. Puis afin d’identifier précisément l’enzyme nous effectuerons un électro-transfert suivi d’une immunorévélation. II) Principe A°) Electrophorèse L’électrophorèse

la biologie moléculaire sont le plus souvent anticipées par des techniques de base. Les principales techniques utilisée couramment sont : Les extractions des acides nucléiques Les digestions enzymatiques par les enzymes de restriction Les électrophorèses sur gel Objectifs Au cours de la première séance de Travaux Pratique, nous avons effectué une mini extraction d’ADN plasmidique à partir d’une culture de bactéries d’Escherichia coli, en utilisant la technique de la lyse alcaline. Cette méthode

moléculaire a subit pas mal de modification depuis sont apparition pour en faire maintenant une technique facile a utilisé et adapté à diverses applications. Résultats : Dessin : Électrophorèse du phage λ et du plasmide après digestion enzymatique La première électrophorèse réaliser après la digestion enzymatique, nous permet de voir l'état des fragments du plasmides et du phages λ . On peut distinguer le plasmide à gauche du marqueur moléculaire, reconnaissable

de nombreuses copies de cet ADN pour que celui-ci soit « visible » à la fin de l'analyse. Les fragments d'ADN obtenus sont séparés et identifiés par électrophorèse. Ceci permet de connaître leur longueur et donc d'en déduire le nombre de répétitions. Les deux méthodes de séparations les plus communes sont l’électrophorèse capillaire et électrophorèse sur gel. Il faut rappeler que les gènes permettent la fabrication des protéines. Mais il existe sur l'ADN des portions qui ne codent aucune protéine

l’albumine sérique de bovin (BSA) et une protéine inconnue Y à déterminer. Une première manipulation consistera à faire migrer par électrophorèse, de la BSA, des isoLDH, des protéines inconnues Y et un marqueur de taille, tous monomères, sur un gel de migration dénaturant SDS. La deuxième manipulation consistera quant à elle à faire migrer, toujours par électrophorèse, des isoLDH et de la BSA natives sous forme de polymères sur des gels de migration non dénaturants ND à différents pourcentages d’acrylamide