Bleu de bromophénol

EcoRI pGEX-IDH + RNase pGEX-IDH + RNase + EcoRI pGEX-IDH + RNase + EcoRI + BamHI On ajoute 4 µL de solution de dépôt aux échantillons, contenant : du glycérol 50% (alourdisseur), de l’EDTA (neutralisation des DNases), ainsi que du bleu de bromophénol et du bleu de xylène de cyanol, marqueurs de suivi de la migration. I.2- Electrophorèse horizontale en gel d’agarose L’ADN plasmidique est chargé négativement : entraîné par un champ électrique, il migre vers l’anode (pôle positif). Le gel d’agarose

Rapport de stage de fin d’études Année Universitaire 2010-2011Licence ProfessionnelleSciences et Techniques Physico-chimiques d’AnalysesDépartement de ChimieModule : stage en entreprise Rapport de stage effectué au sein des Huileries de Souss Belhassan TassilaDédicaces 2Remerciements 3Introduction générale 5Partie 1 : Présentation de la société1. Historique 62. Les produits de la société 63. Ateliers du site de Tassila 7Partie

pigment fixé par molécule de protéine est approximativement proportionnel au nombre de charges + portée par la protéine En absence de protéine la couleur du réactif est marron. Plus la concentration en protéine est élevée , la couleur est de plus en plus bleu . b-Préparation de la gamme étalon une série de tubes qui contient un volume identique mais des quantité croissantes et connues de la protéine de référence (BSA pour notre expérience) . en parallèle , une série de tubes , contenant différent volume

colorant (qui peut être réutilisé). Les bandes d’ADN apparaissent en bleu. Les gels sont observables à ce stade mais on peut vouloir décolorer le fond pour améliorer la qualité des photographies. 1. Rincer dans l’eau distillée pendant quelques heures en changeant l’eau de temps en temps.2. Photographier le gel avec un appareil numérique ou le scanner. | Minigel 8 x 6,5 cm coloré par le bleu de Nile Gel 15 x 10 cm coloré par le bleu de Nile Pistes du minigel : 1 :  ADN génomique  de lentille

l'électrophorèse sur gel, un fragment individuel à l’intérieur d’une des bandes de migration peut être identifié par hybridation. Réalisation de la technique : 1. L’ADN à analyser est soumis à l’action des enzymes de restriction, puis coloration au bleu de bromophénol. 2. Prélèvement des échantillons pour une électrophorèse en gel d’agarose (90 mV/1h) : les fragments les plus courts migrent vers l’anode plus vite que les fragments longs. 3. Coloration de l’ADN par le bromure d’éthidium : une couleur rougeâtre

faite dans un bécher ou une coupelle. Une mesure de volume doit être faite à l’aide d’une pipette, d’une éprouvette u d’une fiole jaugée, cela dépend de la précision demandée. Nous allons préparer 20 mL d’une solution 10 % saccharose et 0.01 % bleu de bromophénol (BBP). La concentration est exprimée en concentration massique pondérale/ B. Dilution On a une solution de approximativement 0.3 M en saccharose et à partir de cette solution on en veut 3, une de 0.15 M une 0.06 M et une de 0.016 M en saccharose

Tampon d’électrophorèse TAE 1X pH 8,0 (Tris –Acétate 40 mM., EDTA 1mM pH 8) à préparer à partir d’une solution concentrée 20X - 10X tampon de réaction enzymatique. - Enzymes de restriction : BamHI, EcoRI, HindIII - Tampon de migration : Bleu de bromophénol, xylène cyanol, sucrose. B. METHODE 1. DIGESTION ENZYMATIQUE • On utilisera de l’ADN provenant de : Licence SPS-L3S5 TP Exp. En Biologie. Responsable du TP: S. GONZALEZ-RIZZO Département de Biologie UFR SEN U.A. 11 o ADN du phage l

S0 4 à l'aide de Ba CI2/ puis on dose ce Ba SO4 soit par pesée, soit par néphélémétrie, selon la teneur en SO2. Produit - co 2 - Solution de H2O2 à 3 % exempte de sulfates - Hcl pur - Indicateur coloré : dissoudre 100 mg de bleu de bromophénol dans 100 ml d'éthanol - Na OH 0,01 N pour analyse des langoustines et des crevettes - Na OH 0,1 N pour analyse des morues - Solution de CO3 Na 2 à 5 % Appareillage : (Cf annexe) - semi microburette - balance - homogénéisateur -

bandelettes qui laisseront place une fois sec aux puits. Pendant ce temps, les deux tubes de la PCR sont préparés c'est à dire que nous avons introduit dans chacun 1µL de tampon de charge ADN 6X qui contient 0,40µL de saccharose et 0,0006µL de bleu de bromophénol). Ainsi les deux solutions ont été introduites dans deux puits distincts puis l'électrophorèse a été mise en fonctionnement sur 100V pendant environ 30 minutes. Les résultats sont exposés et commentés par la suite. Digestion du plasmide

à 7 par dilution d’une solution alcaline titrée exprimée en g/litre d’acide tartrique. • Mode opératoire : - Dans un bêcher de 50 ml, on met : 5ml de vin + 5 gouttes de BBT ( Titrer avec de la soude N/10 jusqu’à l’obtention d’une couleur bleu vert • Calculs : AcT= n ( 0,98 g H2SO4/l Avec n= volume de la soude N/10 AcT= n ( 1,5 g d’acide tartrique/l Acidité volatile (méthode par entraînement à la vapeur) : L’acidité volatile est constituée par les acides appartenant à la