Cinétique enzymatique

COMPLEXE ENZYME – SUBSTRAT D'après Jacques Barrère, Lycée Paul-Louis Courier, Tours On sait que : • Les enzymes sont des catalyseurs d'une très grande efficacité. • Au cours d’une réaction enzymatique, le substrat se transforme progressivement (phénomène progressif nécessitant 3 à 5 minutes) en présence de l’enzyme qui reste inchangée. • Il y a spécificité entre enzyme et substrat. Il y a spécificité de la réaction catalysée par une enzyme donnée. • Plus il y a de substrat

Etude cinétique de la trypsine I. But Le but de ce TP est de déterminer les paramètres cinétiques de la trypsine : * Le KM qui correspond à la constante de Michaelis ; * La Vmax qui correspond à la vitesse maximale et ; * v, la vitesse initiale. II. Principe La trypsine est une enzyme digestive du suc pancréatique qui a pour but de digérer les protéines. La trypsine est une endoprotéase qui hydrolyse les liaisons peptidiques dans lesquelles un acide aminé basique, la

iii Introduction 1 Matériel et Méthodes 5 Résulats 9 Observations microscopiques des fractions 9 Fractionnement cellulaire, matériel biologique et dosage protéique des fractions 10 Cinétique enzymatique 11 Gel d’électrophorèse 14 Discussion 16 CONCLUSION 20 Références 21 Annexe 1 : CINÉTIQUE ENZYMATIQUE : EXEMPLE DE CALCUL POUR L’EXTRAPOLATION POUR LES DONNÉES DE vmax, km et ki AVEC LE GRAPHIQUE 2 (P.12) 18 Table des tableaux et des figures Tableau I : Dosage des échantillons de fractions

vue qu’un déficit enzymatique peut avoir de grandes conséquences. Ex Phénylcétonurie (PAH) ou plus simplement les groupes sanguins. Chaque enzyme a un rôle bien précis et chaque cellule possède un équipement enzymatique qui lui est propre. Cet équipement doit permettre de réaliser toute les réactions nécessaires à sont métabolisme mais aussi à sa fonction. Toute les cellules possèdent des enzymes actives dans leur métabolisme, elles auront donc un équipement enzymatique commun seulement en

et stéroïdes 86 Double couche lipidique et membranes biologiques 88 PARTIE II CATALYSE BIOLOGIQUE : STRUCTURE ET MÉCANISME D’ACTION DES ENZYMES CHAPITRE 5 • Cinétique enzymatique 93 Relations entre la vitesse de réaction et la concentration du substrat ou de l’enzyme 94 Théorie du complexe stéréospécifique et propriétés cinétiques des enzymes 94 Équation de Michaelis-Menten 96 Détermination expérimentale des valeurs de Vmax et de KM 97 Signification physique de KM 98 Signification

sur le modèle suivant : Nom du substrat ------------ type de réaction ------------------- ase Ex : glycogène synthétase est l’enzyme qui synthétise du glycogène B – Mode d’action des enzymes 1 – La cinétique enzymatique On peut suivre une réaction de catalyse enzymatique dans le temps en dosant : • Soit la quantité de substrat transformée S • Soit la quantité de produit formée P La mesure de la vitesse de la réaction (quantité de substrat transformé ou de produit formé

réactions doivent se passer dans des conditions douces, c'est-à-dire à la température de l'organisme qui correspond à une isothermie tempérée, dans une étroite frange de pH et en milieu de force ionique généralement faible. II°) La réaction enzymatique: Ces réactions ne peuvent se produire qu'en présence de catalyseurs biologiques, les enzymes. Un catalyseur est une substance qui accélère la vitesse d'une réaction chimique mais qui n'est ni consommée ni transformée par la réaction. Pour réaliser

DEPARETEMENT DE BIOLOGIE TRAVAUX DIRIGES DE BIOCHIMIE SV(4) CINETIQUE ENZYMATIQUE 1) Que devient la valeur de la vitesse d’une réaction quand [S]= Km, 2Km, 4Km et nKm? 2) 2. Si la valeur de la vitesse maximale d’une réaction étant de 100 µmol/min et Km avec une valeur de 2mM, quelle sera la valeur de la vitesse de la réaction quand [S]= 2µM et 2M ? en déduire la zone qui délimitera les différents types d’ordre cinétique enzymatique. 3) L’étude de l’activité de la trypsine sur la carbobenzoxylysine

TECHNOLOGIES BIOCHIMIQUES ET BIOLOGIQUES TRAVAUX PRATIQUES SUJET 21 Durée : 7 heures Coefficient : 9 BIOCHIMIE (8 points) Durée : 3 heures DETERMINATION DES CONSTANTES CINETIQUES KM et Vmax D’UNE ENZYME L’enzyme étudiée est la phosphatase alcaline. On utilise la cinétique d’hydrolyse du PNPP (paranitrophényl phosphate) à 30°C et à pH = 9,8. PNPP + H2O ----------------- PNP + Phosphate Le PNP (paranitrophénol) jaune en milieu alcalin est dosé par photométrie d’absorption

(enzyme qui brise les polysaccharides). Cette enzyme permet la digestion des sucres lents, en transformant l’amidon et le glycogène en d’autres substances complexes comme le maltose. Au cours de ce TP, nous allons étudier les différents paramètres cinétique de cette enzyme en mesurant l’absorbance d’échantillon à diverses températures, concentrations ou en présence d’inhibiteur. MATERIEL ET METHODES Matériel : Glace pillée Pilon Centrifugeuse Réactifs et produit : Tampon Acétate de