Déshydrogénase

Expression et purification d’une protéine fusionnée à la Glutathion-S-transférase Objectif : Obtention de l’enzyme Isocitrate déshydrogénase (IDH) par purification et clivage de la protéine de fusion Glutathion-S-transférase-Isocitrate déshydrogénase (GST-IDH), exprimée par le plasmide pGEX-IDH dans la souche transformée E. coli JM103/pGEX-IDH, avec pGEX est en réalité pGEX-2T. I. Détermination de la taille de l’insert IDH I.1- Construction du plasmide pGEX-IDH L’insertion/ligation du fragment

naphtalène dioxygénase est un dihydrodiol. Une déshydrogénase le convertit en 1,2dihydroxynaphtalène. Celui-ci est alors le substrat d’une deuxième dioxygénase, pour être transformé en acide 2-hydroxychromène carboxylique lequel est converti en acide trans-o-hydroxybenzylidène pyruvique par une isomérase avant d’être clivé en salicylaldéhyde et pyruvate par une aldolase. Finalement, le salicylaldéhyde est converti en salicylate par une déshydrogénase. De nombreuses espèces Gram- et Gram+ ont été décrites

l’acide pyruvique Décarboxylation de l’acide pyruvique en présence d’acétyl – CoA Conséquence de l’activité enzymatique décarboxylase-déshydrogénate / pyruvate déshydrogénase Cette activité est due à un complexe multienzymatique de 60 peptides généralement ce sont des répétitions de 3 types d’enzymes Transacétylase Déshydrogénase Carboxylase Génère de l’Acétyl-CoA / CO2 / 1 NADH,H+ Acyl->CoA : beta oxydation génère : Acétyl-CoA / nadh,h+ / FADH2 CYCLE DE Krebs : NADH

évolutive des gènes qui codent la lactico-déshydrogénase, enzyme présente chez tous les êtres vivants, est représenté dans le document 1. Montrez que les informations apportées par le document 2 valident le modèle proposé de l'histoire évolutive des gènes de la lactico-déshydrogénase.  Document 1 : Modèle proposé pour illustrer l'histoire évolutive qui a conduit aux gènes qui codent la lactico-déshydro-génase :  Document 2 : La lacto- déshydrogénase (LDH) est une enzyme constituée par l'association

Homme, Bactérie, Babouin, Grenouille, Orang-outan, Mouche, Gorille, Truite, Lézard, Chimpanzé bonobo, Chat, Chimpanzé commun. 2) Comparaison de molécules homologues (document au verso) ( Comparez les séquences du gène qui code la NAD déshydrogénase deux à deux (document au verso) et complétez la matrice des distances (exprimées en nombre de nucléotides différents). Calculer le % minimum de ressemblances entre les séquences ; indiquez si ces molécules sont homologues et donnez la signification

B Anomalie fact IX de la coagulation Xq28 1/20000 * Signes cliniques : hérnarthose (articulations : grave), hémorragies intra musculaire, hématuries spontanées, autres hémorragies, hémorragies néonatales. Daltonisme Déficit en glucose 6P deshydrogénase Dominante liée à l’X Syndrome X fragile Cause très important de retard mental 1 femme /4000 retard tres important 1 homme / 8000 retard moins important ½ par retardé du tout, pénétrance 50% Répétition 9-54 normal 55-230 Prémutations

-Maintiens du site actif dans une conformation adéquate -Site éffecteur ( qui vont avoir un effet sur l'enzyme)==> régulation de l'activité de l'enzyme -Localisation cellulaire -Signaux de localisation tissulaire ( les isoenzyme ) ex : LDH ( lactate déshydrogénase ) c'est un oligomère a 4 sous unités, on en trouve dans les muscle (M) et dans le coeur (H) Dans le coeur la LDH est essentiellement constitué de H4 et de MH3 et dans le muscle on trouve de la LDH M4 et HM3 Il existe du M2H2 qui se trouve à la

permet aussi de constater que le gibbon, suivant le singe araignée et le macaque, est le moins évolué…l’homme étant le plus évolué. Le document 3 est un tableau de comparaison des séquences nucléotidiques d’un gêne codant pour une enzyme, la NAD déshydrogénase .D’après ce tableau,l’homme a le plus de similitudes avec le chimpanzé (89%) puis avec le gorille (86,5%) puis avec l’orang-outan (75.5% de similitudes).Ces similitudes moléculaires au niveau de ce gêne prouvent que l’homme et le chimpanzé sont

l’incubation à 28°C pendant 72h. La lecture des résultats par la mesure de diamètre de la colonie. IV. L’impact des métaux lourd sur l’activité enzymatique : On texte l’impact des Sb, Cr et Cd sur l’activité protéasique, d’arylsulfatase, déshydrogénase des souches obtenues précédemment. L’activité protéolytique : le texte est effectué sur milieu lait gélosé à 20% d’agar additionné de Sb, Cr et Cd à des concentrations différentes. La lecture des résultats par la mesure du diamètre de la zone

départ, les réactions suivantes se produisent en double. Le produit final de la glycolyse est le pyruvate. 1. Hexokinase 2. Phosphohexose isomérase 3. Phospho – fructokinase 1 4. Aldolase 5. Triosephosphate isomérase 6. P glycéraldéhyde deshydrogénase 7. Phosphoglycérate kinase 8. Phosphoglycérate mutase 9. Enolase 10. Pyruvate kinase LES 3 ÉTAPES IRRÉVERSIBLES ETAPE 1: entrée/phosphorylation du G : 1 Hexokinase ETAPE 3: rendre la molécule 3 symétrique avant scission : Phosphofructokinase