Déshydrogénase

la phosphorylation oxydative. Elle est constituée de 5 complexes intégrés dans la membrane interne des mitochondries et qui on chacun des rôles différents comme l’indique le schéma ci-dessous: Le complexe 1 est la NADH déshydrogénase, Le complexe 2 est la succinate déshydrogénase (ou fumarate réductase) Coenzyme Q / l’ubiquinone  flavoprotéine pour le transport d’électrons Principe et méthode L’accepteur final d'électron étant l’oxygène (complexe 4), le fonctionnement de la chaîne respiratoire

la phosphorylation oxydative. Elle est constituée de 5 complexes intégrés dans la membrane interne des mitochondries et qui on chacun des rôles différents comme l’indique le schéma ci-dessous: Le complexe 1 est la NADH déshydrogénase, Le complexe 2 est la succinate déshydrogénase (ou fumarate réductase) Coenzyme Q / l’ubiquinone  flavoprotéine pour le transport d’électrons Principe et méthode L’accepteur final d'électron étant l’oxygène (complexe 4), le fonctionnement de la chaîne respiratoire

ingestion, inhalation, contact avec la peau) peut provoquer la mort car il dérègle le système nerveux de la même façon que l’éthanol. Deuxièmement, il devient toxique après avoir été métabolisé dans le foie sous l’action d’une enzyme, l’alcool déshydrogénase qui le transforme en formaldéhyde. Celui-ci est ensuite métabolisé en acide formique. Ces composés sont à l'origine d'une acidification du corps et d'une cécité par destruction du nerf optique. Les tissus fœtaux sont très sensibles aux effets

généralement d’une vitamine. Les coenzymes : - peuvent être lié de façon permanente à la protéine et participer activement aux évènements réactionnels (ex : enzyme à biotine) - peuvent ne pas être liés de façon permanente à la protéine (ex : déshydrogénases à NAD) CHAPITRE 1 – CARACTÉRISTIQUES GÉNÉRALES DES ENZYMES 6 É É É Enzymologie C. CONFORMATION SPATIALE ET ACTIVITÉ BIOLOGIQUE : EXPÉRIENCE DE C. DÉNATURATION Dans les années 1965 ANFINSEN a réalisé une expérience de dénaturation/renaturation

------------------------------------------------- Expression et purification d’une protéine fusionnée à la Glutathion-S-transférase Objectif : Obtention de l’enzyme Isocitrate déshydrogénase (IDH) par purification et clivage de la protéine de fusion Glutathion-S-transférase-Isocitrate déshydrogénase (GST-IDH), exprimée par le plasmide pGEX-IDH dans la souche transformée E. coli JM103/pGEX-IDH. (NB: pGEX est en réalité pGEX-2T). I. Détermination de la taille de l’insert IDH : * Construction

TP Oxygraphie : Étude de la chaine respiratoireINTRODUCTION : La chaine respiratoire se situe dans la membrane interne des mitochondries, elle est responsable de la respiration cellulaire et de la production d’une grande partie de l’énergie utilisée par les cellules grâce au processus de la phosphorylation oxydative. Le foie, le cœur, les reins et les muscles sont des tissus riches en mitochondries car ils sont des besoins énergétiques élever, donc plus ils ont de mitochondrie, plus ils pourront

Ch3-CO-COOH va être transformé en acétaldéhyde de formule CH3-CHO. Cette transformation est possible grâce à l'intervention d'une enzyme : la pyruvate décarboxylase qui est une enzyme spécifique des levures. Par la suite, une autre enzyme : la alcool déshydrogénase va transformé l'acéthaldéhyde en éthanol de formule CH3-CH2-OH. Cette réaction permet de réoxydé le NADH,H+ en NAD+ à l'origine de la formation d'ATP.

inhibiteurs (a-cétobutyrate, oxamate) (Plagemann et al, 1960;Plummer & Wilkinson,1961;   PURIFICATION On purifie généralement cette protéine par crhomatographie d'affinité. On tire profit de la forte affinité du colorant "bleu réactif" pour les déshydrogénases en général.   DOSAGE DE LA LDH Dosage spectrophotométrique La LDH est généralement dosée par méthode spectrophotométrique de type cinétique. On tire profit du fait que le NADH, la forme réduite, absorbe fortement autour de 340 nm alors que

des électrons. Type de réaction: A– + B → A + B– où A est le réducteur (donneur d'électron) et B l'oxydant (accepteur d'électron). Ex: -oxydases, -réductases, -peroxydases, -oxygénases, -hydrogénases, -déshydrogénases. - transférases : une enzyme dont le rôle est de catalyser le transfert d'un groupe fonctionnel (par un exemple un groupe éthyle ou phosphate) d'une molécule (appelée donneur) à une autre (appelée accepteur). Type de réaction: A–X + B →

+ H2O -> R-CHOH-CH2-CO-ScoA β α β OH acyl~SCoA AW 1 AW 2 1.3.3 Deuxième déshydrogénation L'accepteur des hydrogènes est le NAD+. L'oxydation de la fonction alcool conduit à une fonction cétone. L'enzyme est le 3-hydroxyacyl-CoA déshydrogénase et le composé obtenu est le β cétoacyl-CoA : R-CHOH-CH2-CO~ SCoA + NAD+ -> R-CO-CH2-CO ~SCoA + NADH,H+ β cétoacyl-CoA 1.3.4 Clivage de l'acide gras C'est la dernière réaction de la séquence catalysée par la β -cétothiolase ( l y a s e ) . Au cours