EDTA

migrer sous l’action d’un champ électrique pour séparer les molécules en fonction de leur taille et ceci afin de vérifier la présence de gènes modifiés. Protocole expérimental -Tampon nécessaire TENS : solution de digestion -Tris-HCL 1M (pH 8,5) -EDTA 0,5M (pH 8) -NaCl 5M -SDS 10% -H20 : 50mM : 5mM : 200mM : 0,5% : Pour 10ml 0,5ml 0,1ml 0,4ml 0,5ml 8,5ml Pour 50ml 2,5ml 0,5ml 2 ml 2,5ml 42,5ml Nb: 1) Toutes les solutions sont filtrées et autoclavées 2) La présence

contenant le milieu de culture DMEM à 37°C, sous une atmosphère humide de 5% CO2, jusqu’à obtention d’une couche mono-cellulaire confluente ( 2 à 3 jours). Une solution « Modified Puck’s saline A » (GIBCO, BRL) contenant en plus 0,5 % trypsine, 0,2 % EDTA est ajoutée à raison de 2,5 ml/boite de Pétri. Les cellules sont réincubées à 37 °C jusqu’à ce qu’elles se détachent de la paroi des boites de Pétri. Le contenu est mis dans un tube Falcon de 50 ml et centrifugé à 1200rpm pendant 10 min à température

Magnésium Potassium Sodium Résidus secs à 180°C Oxygène dissous µS/cm à 20°C °C Unités pH CaCO3 Ca, Mg O2 mg/l mg/l mg/l mg/l mg/l mg/l %O2 mg/l mg /l mg/l mg/l 400 12 6.5 - 8.5 Conductimètre Thermomètre pHmètre Dosage volumétrique Titrimetrie EDTA 2 25 25 30 10 20 5 200 250 50 12 150 1500 Titrimétrie KMnO4 Titrimétrie AsCl Chromato ionique Spectrométrie A.A. spectro d’emission ou A.A. idem Calcimétrie Sonde électrochimique > 30 Substances indésirables : Méthodes d’analyses

13 Abréviations ACD Acide citrique 0,8%, Citrate tri sodique 2,2%, Dextrose (glucose) 2,45% AMPc Adénosine Mono-Phosphate cyclique ATP Adénosine Triphosphate BSA Bovine Serum Albumin DMSO Diméthylsulfoxyde EDTA Ethylene Diamine Tetra Acetic acid EFS Etablissement Français du Sang Fg Fibrinogène GP Glycoprotéine MEC Matrice extracellulaire MK Mégacaryocyte NA non activée NI non immun PAR-1 Proteinase-activated

cinétique de la LDH. I / Principe de la séparation 1) Méthode a) Préparation de l’extrait brut Tampon d’extraction Réactifs Concentration mère (M) Concentration fille (M) Facteur de dilution Volume mère (mL) Tris-HCl 0.1 0.05 2 10 EDTA 0.01 0.001 10 2 Glycérol 20% 1% 20 1 β-mercaptoéthanol 0.0715 0.001 71.5 0.28 Eau Qsp 20 F (Tris HCl) = = = 2 Volume mère = = = 10 mL Homogénat de tissu frais

étaient négatives. En effet, le patient avait eu une recherche d’agglutinines irrégulières le matin même, nous avons appelé le laboratoire et celles-ci étaient négatives. Si les RAI avaient été positives, nous aurions envoyé au laboratoire un tube EDTA ainsi qu’un tube sec afin qu’ils réalisent une épreuve de compatibilité entre le sang du patient et le sang de la poche à transfusé. Nous aurions transfusés du sang comptabilisé qui est une poche nominative. Etant donné que le patient avait les deux

obtenir : Destruction des ARN avec de la RN ase 4, l’enzyme et les protéines bactériennes étant ensuite éliminées par extraction phénolique. Les plasmides moins pur sont enfin récupéré par précipitation à l’éthanol et repris dans un tampon TE (Tris EDTA). L’ultracentrifugation sur gradient de densité (chlorure ou sulfate de césium) permet d’obtenir de plasmides beaucoup plus purs. Les plasmides sédimentent sous forme d’une bande localisée vers le milieu du tube que l’on visualise par UV. Les plasmides

dépassent largement le cadre des pathologies hématologiques. C'est l'examen le plus prescrit en France. Il est réalisé à partir d'un échantillon de sang prélevé par ponction veineuse et recueilli dans un tube contenant un anticoagulant sec de type EDTA. On peut pratiquer un prélèvement par microméthode au talon chez le nouveau-né, au bout du doigt chez les patients dont il convient de protéger le capital veineux (chimiothérapie, insuffisance rénale…). L'hémogramme est un examen automatisé. Il a pour

pipettes jaugées de 10,0 et 20,0 mL + propipette burette graduée de 25,0 mL agitateur magnétique + barreau aimanté erlenmeyer de 100 mL béchers de 100 mL bécher poubelle pipette en verre papier millimétré ou tableau -grapheur Solution de EDTA à 0,010 mol.L-1 Solutions de chlorure de calcium de concentration 1,0 ; 5,0 ; 10 ; 15 ; 20 mmol/L Solution de NET Solution de tampon pH10, papier pH Fiches techniques : Utiliser une pipette jaugée pour prélever un volume précis Rincer la

1g/l à ajouter à 100ml)0.5020.7561.011.521.782.042.563.093.634.167 Après avoir boucher et agiter les flacons, on les abandonne à l’obscurité pendant 30 mn. Après, on dose le chlore résiduel en introduisant des réactifs colorimétriques habituels (EDTA, orthotolidine, DPD). On trace la courbe de concentration de chlore résiduel au bout de 30 mn en fonction de la concentration choisie en chlore actif introduit. [Cl2] residuel en fonctio du [Cl2] actif00,511,522,500,511,522,533,544,5[CL2] actif[CL2]