Élution

groupement R – Polyéthylène glycols ( PEG ) : très polaires, pour la séparation des composés polaires, moins stable et moins robustes que polysiloxanes Choix de la phase stationnaire liquide : Si bonne correspondance entre polarités φ stat. / soluté → élution dans l'ordre des points d'ébullition. 2 Four : régulation très précise et reproductible de la température Température augmente → k' diminue → on influence le partage entre les deux phases. Pas température > point d'ébullition car sinon l'analyte

composés thermosensibles des composés très polaires ainsi que des composés de masses molaires élevées. Un appareil d’HPLC comprend différents modules : un réservoir à solvant contenant la phase mobile, un système de pompage permettant d’effectuer des élutions graduées, un injecteur, une colonne, un détecteur et un système d’acquisition de données. FIGURE 1 : COMPOSITION D’UNE CHAINE HPLC Les différents modules sont reliés par des canalisations courtes et de très faible diamètre interne (0,1 mm). Les

..................................7 3.3 Passer l’ADN plasmidique sur une colonne de silice........................8 3.4 Purifier par lavage l’ADN adsorbé...................................................8 3.5 Recueillir l’ADN plasmidique par élution........................................8 3.6 Protocole d’extraction plasmidique..................................................9 IV. TRANSFORMATION D’E COLI PAR L’ADN PLASMIDIQUE…………………………………………....10 1. Principe…… ……………

en contact avec le solvant extracteur. 2. La matière colorée que l’on veut extraire doit être très soluble dans l’éthanol, et ne doit pas non plus réagir avec l’éthanol. 3. Le chromatogramme présente une seule tache après élution du dépôt (C) et trois taches après élution du dépôt (E). La carotte ne contient donc qu’une seule matière colorée décelable. Les épinards contiennent trois matières colorées (ce sont des chlorophylles). La carotte et les épinards testés n’ont pas de matière colorée commune

aminé fixé pourra être élué en augmentant le pH du tampon. Cette méthode servira à séparer : Après séparation on dosera l'alanine (A), et on mettra en évidence l'arginine (R). 2. MODE OPERATOIRE 2.1. Préparation de la colonne et élution de l'alanine. Introduire (si nécessaire) un morceau de coton au bas de la colonne. Verser la résine, conservée en suspension dans du tampon acétate 0,1 mol.L-1 pH 4,2, jusqu'à obtenir une hauteur d'environ 10 cm de résine. Laisser écouler le liquide

contenues dans l’échantillon, avec 10mL d’acide trifluoroacétique à 0.1% dilué dans de l’eau MilliQ (H2O, TFA0,1%). Introduction de 1mL d’échantillon dans la mini-colonne Dessalage de l’échantillon avec 10mL H2O 99,9%, TFA 0,1%, élution de toutes les molécules polaire Elution et récupération des protéines interagissant avec la phase stationnaire, avec 5 mL d’ACN. Les protéines interfèrent avec la phase mobile car l’ACN à une plus grande hydrophobicité que la phase stationnaire. Conserver à-20°C c

-6- TP Biochimie LV 232 – Année 2009 - 2010 La collecte se fera dans ces tubes placés au fur et à mesure dans le petit portoir ; les tubes remplis seront à nouveaux transférés dans le grand portoir. b) Dépôt du mélange sur la colonne et élution Attention !!! la résolution de la séparation dépend en partie de la qualité du dépôt, veiller à bien observer les conseils donnés dans la figure suivante 1 2 • Ouvrir le robinet • Appliquer de la colonne doucement et sans à coups •

Poland Received 22 March 2006; accepted 31 January 2007 Available online 5 May 2007 Abstract Luteolin content in Thymus vulgaris and its extracts have been compared. Luteolin was separated on a thin- layer of silica gel with three-step gradient elution and determined by HPTLC-photodensitometry. The proposed method is simple and sensitive and can be used for the routine assay of luteolin in phytomedicines containing thyme extracts. © 2007 Elsevier B.V. All rights reserved. Keywords: High-performance

C'est la plus utilisée car pas de modification du fonctionnement de la cellule - séléction positive : cellules fixées aux Ac, 2 défauts qui modifient la cellule : fixation Ag-Ac (activation de la cellule) il faut séparer les cellules des Ac (par élution) Technique qui permet à la fois d'analyser les cellules en suspension (cytométrie analytique) et de les séparer (cytométrie de séparation = FACS) Au cours du trajet unidirectionnel des cellules, on applique un laser qui permet : - d'étudier la fluorescence

en contact avec le solvant extracteur. 2. La matière colorée que l’on veut extraire doit être très soluble dans l’éthanol, et ne doit pas non plus réagir avec l’éthanol. 3. Le chromatogramme présente une seule tache après élution du dépôt (C) et trois taches après élution du dépôt (E). La carotte ne contient donc qu’une seule matière colorée décelable. Les épinards contiennent trois matières colorées (ce sont des chlorophylles). La carotte et les épinards testés n’ont pas de matière colorée commune