Marqueur moléculaire

Universite Pierre et Marie Curie Biologie Moleculaire Objectifs au cours de Biochimie PAES 2009 - 2010 Pr. C. Housset (Chantal.Housset@st-antoine.inserm.fr) Pr. A. Raisonnier (alain.raisonnier@upmc.fr) Mise a jour : 18 novembre 2009 Relecture : Pr. A. Raisonnier 2/207 Biologie Moleculaire - Prs C. Housset et A. Raisonnier 2009 - 2010 Plan du cours 2009 - 2010 Biologie Moleculaire - Prs C. Housset et A. Raisonnier 3/207 Plan du cours 3 Plan du cours 9 Objectifs PAES commun DHU Paris-Est

Organisation moléculaire du génome I. Définition moléculaire du gène C'est la séquence complète d'acides nucléiques nécessaires à la synthèse d'un polypeptide fonctionnel ou d'une molécule d'ARN. Celle-ci englobe non seulement la région codante (cadre de lecture), mais aussi les régions en amont (5') et en aval (3') nécessaires à la transcription du gène et à la maturation du transcrit. II. Organisation des gènes : notions d'intron, d'exon et de régions régulatrices A. Chez les

du support physique de l’hérédité, de l’ADN… R.A. Fischer, JBS Haldane et S. Wright (1920-1940), naissance de la génétique de populations. Génétique : étude des caractères biologiques héréditaires (transmis de parents à descendants). Génétique moléculaire : étude de la structure et du fonctionnement des gènes (expression, régulation). Génétique formelle = mendélienne : transmission des caractères de parents à descendants, plus génétique non mendélienne (hérédité cytoplasmique mitochondriale). Génétique

3: Clonage d’un gène dans un plasmide Le clonage moléculaire est une des bases du génie génétique. Il consiste à insérer un fragment d'ADN (dénommé insert) dans un vecteur approprié comme un plasmide par exemple (voir exp4 pour une explication sur les plasmides). Le nouveau plasmide ainsi créé sera ensuite introduit dans une cellule hôte, en générale la bactérie Escherichia coli. Celle-ci sera alors sélectionnée et multipliée afin d’obtenir une grande quantité du plasmide d’intérêt. Cloner

à partir des marqueurs du phage λ. (Cf Annexe 2) Exemple calcul du log(M) : 1 pb= 660 Da Pour le 2ème marqueur de 5148 pb, 5148*660= 3.40 * 106 Da log(M)=log (3.40*106)=6.53 Pour déterminer la taille en pb des fragments libérés après restriction, on mesure leur distance de migration sur le gel de l’électrophorèse 1 que l’on reporte sur le graphe log(M) =f (D). Cette méthode permet de déterminer la taille des fragments grâce au log(M) des marqueurs. (Cf Tableau

Sephadex, des protéines suivantes dont on connaît la masse moléculaire (MM) (Le débit de la colonne est de 5 ml / min) : MM tr (min) Aldolase 145000 10,4 Lactate déshydrogénase 135000 11,4 Phosphatase alcaline 80000 18,4 Ovalbumine 45000 26,2 Lactoglobuline 37100 28,6 1 - Calculer les volumes d'élution (Ve) correspondants. Porter le log de MM en fonction de Ve - Que remarquez-vous ? 2 - Pour la glucokinase, tr = 21 min. Déterminer sa masse moléculaire à l'aide du graphique précédent. Existe t'il une autre

La levure au service de la médecine Mars 2012 UE GEA Licence L3 Principe de sélection de transformants : sélection positive • Complémentation d’une souche réceptrice auxotrophe • Si pas de souche réceptrice auxotrophe, utilisation de marqueurs dominants. Mars 2012 UE GEA Licence L3 Mars 2012 UE GEA Licence L3 Un cas particulier bien utile : sélection positive de mutants du gène URA3 provoquant l’auxotrophie à l’uracile. OUTSIDE INSIDE Glutamine +CO2 +ATP URA2 Carbamoylphosphate

Cette expérience de transgenèse montre à la fois que l'ADN est le support de l'information génétique et qu'il est universel dans le monde vivant. Cette universalité conforte l'idée d'une unité du vivant tant à l'échelle cellulaire qu'à l'échelle moléculaire. (Sans ADN il n'y aurai pas de gène, sans gène il n'y aurai pas se synthèse des protéines.) Exercice n° 2 1/ Le gène, par sa séquence de triplets de nucléotide d'ADN nous informe sur la séquence des acides aminées d'une protéine. Un triplet

 L’hybridation moléculaire in situ : Introduction : L’Hybridation in situ (H.I.S) est une technique qui permet de localiser, et de mettre en évidence des séquences d’acides nucléiques spécifiques au niveau d’une coupe de tissu, d’une préparation chromosomique ou sur colonie de bactéries à l’aide de sondes. Elle a été mise au point en 1969 par GALL et PARDUE. 1)Principe général : On associe par hybridation une sonde d’acides nucléiques (ADN ou ARN simple brin ) de séquence connue (dont l’emplacement

reconnaissance de motifs par des récepteurs putatifs qu'il nomme les récepteurs de reconnaissance de motifs moléculaires. Ce modèle est approfondi à partir de 1994 par Polly Matzinger, qui développe la théorie du danger. D'après Matzinger, le déclenchement de la réponse immunitaire se ferait sur la base de motifs moléculaires associés aux pathogènes par les récepteurs de reconnaissance de motifs moléculaires. Ce modèle fut validé expérimentalement depuis par l'identification de récepteurs de signaux de dangers