Méthode De Dosage Des Proteines

différentes (SAB et cytochrome c ) par méthode de chromatographie d'exclusion sur gel séphadex (G50) en déterminant les caractéristiques de notre colonne par exclusion grâce au dextran bleu , de vérifier ensuite notre séparation par spectrométrie et de doser par méthode de Lowry et al nos fraction obtenue . PRINCIPE  ET BUT : La chromatographie d’exclusion moléculaire (aussi appelée tamis moléculaire ou filtration sur gel) permet de séparer les protéines suivant leur rayon de Stockes. En effet

protéases et de collagénases) qui vont agir sur les liaisons fortes entre cellules constituant le tissu afin de séparer les cellules entre elles. Il s’agit d’une méthode rapide possédant un bon rendement. Les suspensions cellulaires obtenues nous permettent de compter le nombre de cellules présentes et de déterminer la teneur en protéine. Après la mise en culture, nous obtenons la culture cellulaire. Les lignées cellulaires vont dépendre de la réussite de la culture secondaire. La culture secondaire

est basé sur une méthode enzymatique colorimétrique. Pour la mise en évidence du taux de glucose, on a besoin de 3 tubes : Le 1er du blanc contenant 1 cc du réactif de travail Le 2eme d'étalon contient 1ml du R de travail +0.1 ml R3 Celui d'ech, contient 1ml de R de travail +0.1ml du sérum Il faut agiter les tubes et attendre 30mn pour mesurer la D.O á505nm. D.O Calculer le taux du glucose (G = g/l). D.O standard Valeurs normales : 0.70 -1.05 g/l 2- Créatinine : Le dosage de la créatinine

en ont deux et la glycine qui n’en possède pas). Chaque acide aminé est classé dans le système R/S : tous les acides aminés sont de la série S, sauf la cystéine qui est de la série R. Cas particulier : 2S 3R T et 2S 3S I Isomère L : (dans les protéines) Isomère D : Chaque acide aminé dévie le plan de polarisation : de façon lévogyre (à gauche) et de façon dextrogyre (à droite). Les propriétés physico-chimiques : Les propriétés ioniques : Chaque acide aminé libre

inhibiteurs (a-cétobutyrate, oxamate) (Plagemann et al, 1960;Plummer & Wilkinson,1961;   PURIFICATION On purifie généralement cette protéine par crhomatographie d'affinité. On tire profit de la forte affinité du colorant "bleu réactif" pour les déshydrogénases en général.   DOSAGE DE LA LDH Dosage spectrophotométrique La LDH est généralement dosée par méthode spectrophotométrique de type cinétique. On tire profit du fait que le NADH, la forme réduite, absorbe fortement autour de 340 nm alors

Etudiant : Elise Absa NGOM Sommaire Introduction .....................................................................3 I) Matériel et méthodes 1- Purification de la stathmine …………………………………….5 2- Electrophorèse …………………………………………………………6 3- Western blot …………………………………………………………….8 4- Dosage de la tubuline ……………………………………………….8 5- Cosédimentation ……………………………………………………..9 II) Résultats et discussion 1- Purification de la stathmine ……………………………………

décrits chez les patients avec glomérulonéphrite nécrosante idiopathique et la polyangéite microscopique (MPA) [5].Dans un premier temps, la seule méthode disponible pour la détection ANCA était la immunofluorescence indirecte (IFI) essai sur humain normal neutrophiles fixés à l'éthanol [3]. Bien qu'actuellement nombreux formats de dosage, tels que des dosages immunologiques liés à une enzyme (ELISA), immunoessais chimioluminescence (CLIA), des tests d'écoulement latéral (LFA), et les combinaisons de

Observations : <& Récapitulez les objectifs de ce TP : ai I) Quel est le principe de la méthode de purification utilisée ? Dans quelles fractions doit-on s'attendre à récupérer le lysozyme ? Justifier votre réponse. s 1/6 Compte rendu du TP n°l BL01 Purification du lysozyme de blanc d'ceuf II) Dans les autres fractions (nommez les) que doit-on s'attendre à récupérer ? fia n - III) Quel est le principe du dosage de l'activité enzymatique utilisé durant cette séance deTP? IV) Mesure de l'activité

volume utilisé pour le dosage spectrophotométrique de la gamme étalon est de 1,5mL. Chaque tube dosé doit avoir le même volume (1,5mL), auxquels nous ajoutons 2mL de Biuret. Réaction du Biuret La réaction du Biuret est la formation d’un complexe pourpre entre le Biuret (NH2-CO-NH-CO-NH2) et de deux liens peptidiques consécutifs en présence de cuivre en milieu alcalin. Le complexe de coordination résultant absorbe fortement dans le bleu (540nm). Ce qui permet de doser les protéines par spectrophotométrie

phase stationnaire dans une colonne). L'enzyme se fixe alors de manière non covalente au bleu, laissant ainsi les impureté (autres protéines) passer entre les maille du gel de cibracron et être éluées en dehors de la colonne, la purification ne sera partielle car le bleu de cibracron est relativement peu spécifique de la LDH, en effet il est spécifique à un groupe de protéine. On récupère enfin l'enzyme après lavage avec un éluant avec un tampon content du NADH et de l'acide oxamique : un analogue du