Phosphatase

La Phosphatase alcaline Le but du TP Nous voulons étudier la Phosphatase alcaline. Nous voulons observer ce que devient son activité lorsque l’on fait varier différents facteurs, comme la concentration en substrat initiale dans une première partie, et le pH dans une seconde. Pour s'intéresser à son activité, on se servira du calcul de son activité spécifique dans une situation donnée, et de certaines représentations de la vitesse de réaction en fonction de la concentration en substrat, ou en fonction

Commande nerveuse Activation musculaire (potentiels d'action) Phénomènes physiologiques Relargage du Calcium (reticulum sarcoplasmique) Métabolisme anaérobie alactique Métabolisme anaérobie lactique ATP Resynthèse de l'ATP ATP Hydrolyse de Pi + ADP l'ATP ( Myosine-ATPase) Métabolisme aérobie Pi + ADP Phénomènes biochimiques V0 F0 Pmax Phénomènes mécaniques Métabolisme anaérobie alactique Deux réactions métaboliques, qui ne nécessitent pas la présence d'oxygène

Etude expérimentale de la phosphatase alcaline I. BUT : Etude cinétique de l’activité enzymatique d’une enzyme la phosphatase alcaline .On procède à :  Une étude cinétique de la libération des produits de la réaction.  Etude de l’influence de la concentration de substrat(PNPP) sur la vitesse de la réaction.  Etude d’un phénomène de compétition entre deux substrats. II. PRINCIPE :  L’ étude cinétique de la libération des produits de la réaction

TP : ETUDE EXPERIMENTALE DE LA PHOSPHATASE ALCALINE BUT Nous allons déterminer les paramètres cinétiques d’une enzyme en étudiant l’influence de la concentration en substrat et celle de la présence d’un inhibiteur dans le milieu réactionnel. On va mesurer l’activité de l’enzyme en mesurant par spectrophotométrie l’apparition du produit de la réaction qui sera coloré. PRINCIPE Nous allons utiliser dans ce TP la phosphatase alcaline de veau. C’est une enzyme à 2 substrats qui à un pH optimal

Purification et dosage de la phosphatase alcalinePurification et dosage de la phosphatase alcaline Dimère de la phosphatase alcaline d E.coli Table des matières Fiche de synthèse I. Genèse du projet ................................................................................................................. 1 II. Présentation du matériel et des méthodes ........................................................................... 2 II. 1. Estimation de la quantité de protéines par méthode

de la réaction.1 En se basant sur des principes d’enzymologie et de métabolisme, on étudie l’effet d’un inhibiteur de la phosphatase alcaline – le phosphate inorganique –, sur la vitesse maximale et le KM dans le but de calculer la constante d’inhibition et de déterminer s’il est question d’un inhibiteur compétitif, incompétitif ou non-compétitif. En fait, la phosphatase alcaline numéro 3.1.3.1 n’est pas une enzyme spécifique à un seul substrat ce qui lui permet d’agir sur tous les monoesters

1 et 2 (plasmides 1 et 2) ont une activité phosphatase alcaline élevée, indiquant que la phosphatase alcaline est dans l’espace périplasmique. Ces résultats montrent que le segment 1 sert de peptide de début de transfert, son extrémité N-terminale faisant face au cytoplasme et son extrémité C-terminale (phosphatase alcaline) dans le périplasme. Les chimères entre les segments 2 et 3 (pasmide 3 et 4) ont une activité faible, indiquant que la phosphatase alcaline est dans le cytoplasme ; le segment

TP ENZYMOLOGIE ETUDE CINETIQUE DE LA PHOSPHATASE ALCALINE ET DETERMINATION DU PH OPTIMUM Introduction Les phosphatases sont des enzymes qui hydrolysent les monoesters phosphoriques. Ici, on étudiera les effets de l’enzyme sur le PNPP. La phosphatase alcaline hydrolyse le PNPP suivant la réaction suivante : PNPP + H2O PNP Cette réaction libère du PNP. Le PNPP est incolore, alors que le PNP est jaune en milieu alcalin, ce qui permet de le doser directement par spectrophotométrie à 410nm

TP : étude expérimentale de la phosphatase alcaline But Nous cherchons à déterminer les paramètres cinétiques d’une enzyme, la phosphatase alcaline, en présence d’un ou de deux substrats. Pour cela nous avons, dans un premier temps, étudié l’activité de cette enzyme en présence de différentes concentrations d’un seul substrat. Ce qui nous a ensuite permis de l’étudier en présence de deux substrats. Principe Le p-nitrophényl phosphate (PNPP), qui sera notre premier substrat, est un composé

EN PHASE HOMOGENE: ETUDE DE LA PHOSPHATASE ALCALINE Les phosphatases ou phosphomonoestérases sont des enzymes qui hydrolysent les monoesters phosphoriques avec formation de phosphate minéral et d'un alcool ou d'un phénol, selon la réaction: R-O-PO32- + → R-OH + HPO42- METHODOLOGIE La manipulation permet l'étude de l'influence de plusieurs facteurs sur la réaction enzymatique. L'enzyme utilisée est une préparation commerciale partiellement purifiée de phosphatase intestinale de veau, la réaction