Plasmide Ti

construction va être multipliée pour qu’il y en ait en quantité suffisante. Pour ce faire, la construction sera introduite dans une bactérie qui va se reproduire. Cette étape est appelée le clonage de gêne. Le tout sera ensuite transféré dans un plasmide (fragment d’ADN qu’on peut retrouver dans le cytoplasme des bactéries ou des levures), qui sera à son tour introduit dans le génome de la cellule par un des deux moyens que je vais expliquer ci-dessous. D’abord, il y a la transformation biologique

de transport actif utilisant l’énergie du gradient électrochimique Mécanisme de transport actif : la translocation de groupe Mécanisme de transport actif : le transport du Fer V. 1) 2) 3) 4) 5) 6) Génome bactérien Le nucléoïde Les plasmides La réplication Expression d’un opéron (unité transcriptionnelle) bactérien La transcription La traduction VI. Les structures externes de la bactérie 1) Définition 2) Le flagelle VII. Les spores bactériennes 1) Définition et structure

blot et d’ELISA). Concepts clefs et difficultés attendues : Distinguer techniques acides nucléiques et techniques protéines. Distinguer séquence codante des autres. Distinguer vecteurs d’expression et vecteurs de clonage. Organisation d’un plasmide et étapes d’un sous-clonage : à reconstituer à partir d’éléments épars dans le TP Bonnes pratiques en biologie : importance des contrôles positifs et négatifs (ex digestion ER) Sécurité des personnes et de l’environnement. Evaluation :

cytoplasmique ou nucléaire •  Exemples d organises vivants connus +++ Les bactéries •  Organismes unicellulaires •  Dimension 1 à 10 microns •  4 éléments : –  La paroi –  La membrane –  Le cytoplasme –  Un chromosome et/ou plasmide Structure d une bactérie PAROI PLASMIDE MEMBRANE cytoplasmique CHROMOSOME CYTOPLASME Structure d une bactérie éléments obligatoires •  La paroi : –  entoure la bactérie –  détermine sa forme –  fine ou épaisse –  rôle protecteur –  passage obligé des échanges avec

température. Les plasmides  ADN double brin circulaire, extra-chromosomique, autonome pour sa réplication (possède une origine de réplication) et : Des promoteurs Sp6 et T7 Un gène de résistance aux antibiotiques qui permet la sélection des plasmides après transfert du gène : Marqueur Génétique de Résistance (c’est la séquence qui permettra de sélectionner les bactéries qui ont ingérées le plasmide) Un gène d’identification des recombinants : c’est la séquence LacZ-α dans les plasmides pGEM, qui code

techniques : On peut procéder de façons très différentes. Ainsi : - une cellule mise seule en culture et qui, en se divisant plusieurs fois, donne naissance à plusieurs cellules, forme un clone cellulaire. - une molécule d'ADN insérée dans un plasmide que l'on multiplie ensuite dans une bactérie donnera un clone moléculaire. - la dissociation des cellules d'un embryon au tout au début de son développement après seulement 2 ou 3 divisions de l'œuf fécondé, alors qu'il n'est formé que de quatre

Les vecteurs les plus connus sont les plasmides, petites boucles d'ADN d'origine bactérienne. • La transformation de l'organisme cible, avec une pénétration de l'ADN dans la cellule, et l'intégration de l'information génétique. L'introduction du transgène, ou du vecteur dans le génome de la cellule, peut se faire par perméabilisation des membranes (bactéries, levures), par un procédé mécanique (projection de microbilles de tungstène ou d'or portant le plasmide), ou encore par un vecteur biologique

151pb =867pb). 2° Un plasmide est un vecteur de clonage de petite taille d’origine bactérienne. Il correspond à de l’ADN circulaire extra chromosomique présentant une origine de réplication (il se sert de la bactérie dans laquelle il est pour se répliquer). Le plasmide possède également des sites des restrictions correspondant à des sites de reconnaissance pour des enzymes des restrictions (cela permet d’insérer ce que l’on veut étudier). On va insérer le plasmide dans une bactérie. Certaines

purification et clivage de la protéine de fusion Glutathion-S-transférase-Isocitrate déshydrogénase (GST-IDH), exprimée par le plasmide pGEX-IDH dans la souche transformée E. coli JM103/pGEX-IDH, avec pGEX est en réalité pGEX-2T. I. Détermination de la taille de l’insert IDH I.1- Construction du plasmide pGEX-IDH L’insertion/ligation du fragment IDH dans le plasmide pGEX-2T a nécessité que l’insert IDH et le vecteur soient clivés par les mêmes enzymes de restriction (ou compatibles). Le vecteur

dans un plasmide Pbluescript recombinant Email : Groupe 13 Résumer : Cet article à pour but de montrer comment cloner de l'ADN de phage λ avec comme vecteur un plasmide pbluescript. Nous avons pu voir au cour du TP comment utiliser les techniques de clonage moléculaire via un vecteur, la digestion enzymatique avec les enzyme EcoR1 et Hind III, la transgenèse par choc thermique, l'électrophorèse sur gel d'agarose, et la minipréparation a l'aide du kit d'extraction de plasmide. Les résultat