Plasmide Ti

Ils existe deux catégorie de techniques permettant la formation d'OGM : le transfert direct et le transfert indirect. Le transfert direct est une introduction directe de l'ADN d'un gène (dit gene d'interet) dans le noyau, souvent transporté pas un plasmide, mais sans autre intermediaire. Le transfert indirect, lui, est réalisé par l’intermédiaire de bactéries, comme par exemple Agrobacterium tumefaciens, qui permettent de véhiculer le gène d’intérêt. Il existe différentes techniques permettant

étape consiste à cloner le gène YFG dans un plasmide. Un plasmide est une petite molécule d'ADN circulaire qui se multiplie en même temps que les chromosomes. Pour obtenir de grande quantité de ce plasmide celui-ci est tout d'abord introduit dans une bactérie -E. coli-(l'avantage d' E. coli est qu'elle se multiplie très rapidement). Généralement un antibiotique est utilisé pour ne permettre la croissance que des bactéries qui ont reçu le plasmide (le plasmide porte un gène de résistance à l'antibiotique)

ou à un stade de son développement. * Dans certains cas, l'insertion du transgène dans un vecteur. Ce vecteur peut comporter des séquences de régulation, réplication ou encore des marqueurs de sélection. Les vecteurs les plus connus sont les plasmides, petites boucles d'ADN d'origine bactérienne. Les séquences de régulation comportent obligatoirement un promoteur adapté à l'organisme receveur. Les marqueurs de sélection sont généralement des gènes de résistances à des antibiotiques ou des herbicides

entour les bactérie, elle permet a la bactérie de se defendre.  Plus facile de casser une paroi de cellule eucaryote que de bactérie. Les plasmide sont un exemple de résistance aux agressions, et résistance aux antibiotique = plasmide = 90% de la résistance aux antibiotiques. Dans les PVD du fait de la mauvaise gestion des antibiotique, les plasmides sont ultra résistants. Dans le cas de la tuberculose la résistance est du aux chromosomes : ce sont les souches XDR ( Souches ultra résistante)

vecteur de clonage. Les vecteurs de clonages sont des plasmides et possèdent tous des caractéristiques communes. Ils ont une origine de réplication qui leurs permet de se répliquer de manière autonome, un ou plusieurs gènes de résistance a un antibiotique pour la sélection des plasmide ayant intégrés le vecteur ou non, ainsi qu'une région possédant des sites de restrictions uniques pour différents enzymes de restrictions. La plasmide utilisé dans cette expérience est le pBlueScript, il possède

l'hôte: On utilise généralement une bactérie (E. coli) parce qu'elle a un temps de génération court (20mn. à 37°C) B/ Un vecteur : Les plasmides Les plasmides sont de petits morceau d'ADN circulaires, double brin que l'on trouve dans les bactéries en dehors du chromosome. Ils se répliquent grâce aux enzymes présents dans la bactérie. Les plasmides Le chromosome C/ Les enzymes de restriction Les enzymes de restriction sont une sorte de ciseaux moléculaires servant à couper l'ADN en

TP Séparation d’ADN par électrophorèse analytique et préparative I. But : Ce TP a pour but d’extraire l’ADN plasmidique pUC18-wzc à partir d’un culot d’E.coli, d’établir la carte de restriction du plasmide grâce à sa digestion par des enzymes et enfin d’isoler et purifier le fragment d’intérêt wzc dans pUC18-wzc. II. Principes : Pour mener à bien ce TP on utilise la technique d’électrophorèse sur gel d’agarose. Cette technique permettra la séparation des différents fragments obtenus par

Clonage d’un gène dans un plasmide Le clonage moléculaire est une des bases du génie génétique. Il consiste à insérer un fragment d'ADN (dénommé insert) dans un vecteur approprié comme un plasmide par exemple (voir exp4 pour une explication sur les plasmides). Le nouveau plasmide ainsi créé sera ensuite introduit dans une cellule hôte, en générale la bactérie Escherichia coli. Celle-ci sera alors sélectionnée et multipliée afin d’obtenir une grande quantité du plasmide d’intérêt. Cloner un gène

vecteur ADN cloné en kb Plasmide Phage lambda Cosmide Phage P1 BAC(bacterial artificial chromosome) YAC (yeast artificial chromosome) 20 25 45 100 300 1000 Les plasmides comme vecteurs de clonage (1) Molécule d’ADN de taille réduite, d'origine bactérienne Molécule d’ADN circulaire Peut être considérée comme un minichromosome capable de réplication autonome Confère la résistance à un ou plusieurs antibiotiques Molecular Cell Biology Les plasmides comme vecteur de clonage

2 : Biologie moléculaire Principe, technique et applications 1.4 enzyme de restriction 1.4.1 1.4.2 1.4.3 1.4.4 1.4.5 Applications 1.4.5.1 Vecteurs Plasmide (ADN bactérien) pBR322 : vecteur de 4363 pb (très petite tailles) composé de 2 sites de restriction uniques situés dans les gènes de résistance (Amp, Tet). Figure 1 Plasmide bon vecteur car petite taille, 2 sites de résistance qui comprennent un seul site de de restriction chacun. 1.4.5.2 Carte de restrictions Une carte de restriction