Solvant apolaire

fait pour la première fois : - utiliser des solvants apolaires - pipeter des solvants apolaires (en commençant par remplir/vider la pipette une ou deux fois) - utiliser une vaisselle sèche - recouvrir les contenants de parafilm afin d’éviter la dissémination des vapeurs des solvants II. Sécurité L’utilisation de solvants apolaires va nécessiter également des nouvelles précautions au niveau de la sécurité. En effet, les vapeurs des solvants sont très inflammables, ils sont donc utilisés

solubles dans l'eau. Principe : On considère 2 solvants non miscibles S1 et S2 et une molécule A qui va pouvoir se répartir entre les 2 solvants. Il s’établit l’équilibre suivant Adissous dans S1 = Adissous dans S2 La constante d’équilibre de cet équilibre s’appelle coefficient de [A]S2 partage : = K = cste [A]S p 1 Comme KP est une constante, on peut montrer mathématiquement qu’il est plus efficace pour extraire A du solvant S1 à l’aide du solvant S2, d'utiliser plusieurs fois un petit volume

comme la cellulose ou le cephadex, immergée dans un solvant (éluant). Une grande quantité de solvant est ensuite pompée lentement à travers la colonne et est collectée dans des tubes séparés au fur et à mesure de sa sortie à l’extrémité inférieure de la colonne (l’élution) Les divers composants de l’échantillon se déplacent à des vitesses différentes à travers la colonne et sont ainsi fractionnés dans des tubes différents t0 t1 t2 Solvant Mélanges de biomolécules AIR Adsorbant (phase stationnaire)

l’affinité des substances étudiées afin de provoquer leur séparation (Voet et Voet, 2005). Il est ici question de déposer quelques gouttes d’une matrice à séparer sur une phase stationnaire (couche de silice polaire) et de faire migrer une phase apolaire ou éluant (polaire) sur le chromatogramme afin d’entraîner les composants de la matrice en fonction de leur affinité avec l’éluant. L’éluant migre sur la phase stationnaire par capillarité et entraîne les pigments qui se distribuent à différentes

grâce à la possibilité de fabriquer des particules de très faible taille (3 - 10 µm) et de granulométrie homogène, qui permettait de réaliser des colonnes très efficaces impliquant la nécessité d'employer des pompes à haute pression pour pousser les solvants (et des tubes résistants pour y mettre les phases stationnaires). Dans un premier temps, nous présenterons le principe et l’appareillage de l’HPLC ainsi les différents modes de séparation. Nous développerons les notions fondamentales et nous finirons

température correspond à la disparition de la frontière du liquide et du gaz, ce nouvel état est appelé « état particulier ». Le terme « critique » a été employé pour la première fois en 1869 par ANDREWS pour qualifier cet état particulier. Le pouvoir solvant des fluides supercritiques a été étudié par HANNAY et HOGARTH. Suite à ces travaux, l'état supercritique reste une curiosité dont les applications se développeront plus d'un demi-siècle plus tard. Ainsi, le premier brevet, déposé aux USA remonte

polaire. Or, quand on est en phase inverse, on a fait quelque chose pour qu’on soit dans une phase apolaire. On a donc, sur les OH de la silice, fixé des greffons (les C18). Ainsi, la phase stationnaire devient apolaire (hydrophobe). Si le soluté est fortement retenu, il y a des interactions fortes. La moléculaire la plus polaire a donc peu d’interactions avec la phase stationnaire qui est apolaire, donc elle sort la première. C’est donc l’acide benzoïque qui est le plus polaire. Influence

C, D et E. Sous forme libre ce sont des apoprotéines primaires, elles s'associent en donnant des apoprotéines secondaires que l'on retrouve dans les lipoprotéines. Ces protéines ont un rôle structural, elles permettent les interactions avec l'eau solvant mais servent également à reconnaître des récepteurs membranaires spécifiques. B – Classification des lipoprotéines La classification des lipoprotéines est fondée sur leur densité. La densité des des lipoprotéines varie selon la teneur et la

l’éluant : • Le solvant utilisé ne doit pas réagir avec les constituants du mélange. • Il est donc choisi en fonction de son aptitude à dissoudre les constituants à séparer. Quand la migration est terminée, on détermine pour chaque constituant la vitesse de déplacement noté Rf Calcul de Rf : Distance parcourue par le constituant Rf = Distance parcourue par le solvant 2) Manipulation :

performance lorsque l·on a optimisé la technique (diminution de la taille de particules de la phase stationnaire, régularité de cette phase«). Š Š Š ƒ PRINCIPE D·abord il y a la préparation de l·échantillon on le dissolvant dans un solvant, de façon à pouvoir l·introduire dans le système chromatographique, ici, le dispositif du HPLC. Ensuite il y a la mise en contact avec l·éluant, qui constitue la phase mobile, entraîné par une pompe à l·intérieur d·une colonne (contenant des grains