Southern blot

dollars en 1/4 d'heure "Pacific biosciences" 9 Intérêt: Pouvoir observer les polymorphismes et parier à 70% sur les maladies qu'ont pourrait avoir, et prévenir ces maladies. --> Médecine prédictive. 3.3 Le southern Blot Technique de transfert d'ADN (d'ARN = Northern Blot, de protéines= Western Blot) sur une membrane à partir d'un gel d'électrophorèse. Objectif: détecter une séquence précise au sein d'un génome, (ex: mise en évidence de polymorphismes) On prend de l'ADN natif extrait de cellules ou tissus

bases. L’HIS est un outil incomparable pour étudier l’expression des gènes. Elle est proche, dans son principe, des Southern et des Northern blots et repose, comme eux, sur l’hybridation d’une sonde d’acide nucléique (ADN ou ARN) marquée dont la séquence est complémentaire des acides nucléiques que l’on cherche à identifier et à localiser. Alors que les Southern et Northern blot se font sur des broyats de tissus, l’HIS s’effectue sur coupe histologique, apportant ainsi des informations précises

fragments de l’ADN génomique pour le clonage et la préparation de sondes P (Kirkpatrick et al, 1987) marquées au 32 ou à la Ces sondes, par hybridation, perdigoxigénine. mettaient une détection précise de l’ADN génomique étudié. Leur utilisation en «southern blot» (Daire et al, 1992). Actuellement, le séquençage des extrémités du fragment d’ADN cloné, choisi pour la préparation de la sonde génomique, conduit à l’obtention d’amorces spécifiques d’une maladie, qui sont choisies de telle sorte qu’elles

sur des fragments de tissu adjacents à ceux qui sont fixés). Cela permet d’effectuer immédiatement des coupes au cryostat autorisant un examen rapide (extemporané) ou des techniques particulières (immunohistochimie, hybridation in situ, PCR, Western blot...). Cytogénétique et culture Les prélèvements pour la culture de tissus et la cytogénétique doivent être faits rapidement et stérilement. Autres méthodes Il n’est pas rare d’effectuer, d’autre part, la congélation rapide, sans autre précaution, d’un

Polymorphisme de restriction 194 14.7 Polymorphisme Msp I de l�fapoA-II 195 14.8 Cartes de restriction 196 14.9 Hybridation d�fune sonde 197 14.10 Calcul de la Tm 198 14.11 Sonde hybridee 199 14.12 Sonde specifique d�fallele (ASO) 200 14.13 Southern blot 202 14.14 PCR 203 14.15 Didesoxyadenosine triphosphate 204 14.16 Reaction de sequence 206 14.17 Sequencage d�fADN 207 14.18 Gel de sequence Plan du cours 8/207 Biologie Moleculaire - Prs C. Housset et A. Raisonnier 2009 - 2010 Objectifs

9h30 : changement des cages des rats des salles utilisés en travaux pratique et de recherche 1 9h30 - 10h00 : lavage des cages des rats 10h00 - 10h20 : pause café 10h20 - 11h00 : préparation à partir des échantillons de PCR et lancement du Southern Blot pour le génotypage 11h00 - 11h30 : préparation des cages, remplissage de sciure et nettoyage de la laverie 11h30 - 12h00 : dernière mise au point sur le fonctionnement d’une animalerie et analyses des gels de génotypage II. L’animalerie

Support de Cours (Version PDF) - un bas niveau socioéconomique. Diagnostic : Les HPV sont des virus non cultivables et ne sont détectables que par des techniques de biologie moléculaires. Les techniques traditionnelles, comme le Southern blot (cf. glossaire) ou le dot blot (cf. glossaire) qui étaient référentes, ne sont actuellement plus d'utilisation courante au profit de la PCR ou de la capture d'hybride (sonde ARN révélée par chémoluminescence (cf. glossaire). Les seuils de sensibilité sont de

générer une plante entière. Ceci ne sera rendu possible que par les techniques de culture in vitro. 3. Suivi du gène dans la plante Pendant tout son développement, la plante néoformée sera étudiée grâce à des méthodes de biologie moléculaire (Southern ou Western-blot, PCR) afin de vérifier l'intégration des transgènes et d'analyser leur expression. Le temps écoulé entre l'introduction du transgène dans les premières cellules végétales et l'obtention de la descendance varie entre 6 et 9 mois et dépend

acides nucléiques Principaux oligonucléotides Spectres UV des bases nucléiques Spectre UV des acides aminés Dosage des acides nucléiques Electrophorèse des acides nucléiques Sonde nucléique (définition) Hybridation d’une sonde Calcul de la Tm Southern blot Drépanocytose (anémie falciforme) Marquage : nick translation Marquage : random priming Marquage : terminal transferase 2006 - 2007 Biologie génique - Pr A. Raisonnier 5/183 Plan du cours 124 125 126 127 128 130 131 132 133 134 135

d'années une nouvelle génération de marqueurs très performants a vu le jour : les variants de la molécule d'ADN elle-même. La révélation des variants individuels (« polymorphismes ») de l'ADN nécessite la mise en œuvre d'une technique complexe, le Southern blot, procédé particulier de buvardage qui porte le nom de son découvreur. Les principales étapes nécessaires pour visualiser de tels polymorphismes sont les suivantes : extraction de l'ADN de longue taille à partir des lymphocytes sanguins, digestion