Southern blot

de Mme X L'analyse du caryotype de l'embryon porté par Mme X indique qu'il a pour formule chromosomique : 46 chromosomes dont XY. On réalise l'analyse de l'ADN de Mme X, de l'embryon et des hommes II3 et II4. On utilise la technique du Southern blot. L'ADN du génome est digéré en utilisant l'enzyme de restriction Bgl II. Les fragments de restriction sont séparés par électrophorèse puis dénaturés. La sonde radioactive DX13 est utilisée. Une autoradiographie est réalisée. Les résultats sont

rechercher si madame X est porteuse d'une pré mutation ou mutation complète par biologie moléculaire (PCR et southern bloth) : étude de la méthylation et du nombre de répétition CGG. 7. Dès 10 SA un diagnostic de sexe fœtal sur sang maternel montre que le fœtus est de sexe masculin. Un prélèvement des villosités choriales est réalisé. Le laboratoire envoie une photo du Southern Blot réalisé qui montre que le foetus est indemne (profil A). A qui appartiennent dans cette famille les profils B

معطيات الوثيقة 1 حدد معللا جوابك كيفية انتقال المرض و احتمال اصابة الحميل بالناعورية ( 1 ن ). .Xملحوظة : الحليل المسؤول عن الناعورية محمول على الصبغي [pic] [pic] الوثيقة 2 : الخريطة الصبغية للمولود المنتظر . [pic][pic][pic] Southern-blot بتقنية ADNالوثيقة 3 : تحليل 1 kb = 1 000 nucléotides. 2_ بين الاستنتاجات المستخلصة من الوثيقة 2 و 3 لتشخيص المرض عند الحميل ( 2 ن ) .

moléculaire. Par le biais de ces techniques, nous allons utiliser en premier lieu une sonde marquée à la digoxygénine pour révéler les transcrits, utiliser une technique de RT-PCR pour amplifier l’ADNc à partir de l’ARN et quantifier les transcrits par Southern Blot. I. Première séance : préparation de la sonde marquée à la digoxygénine Cette séance consiste à extraire l’ADN plasmidique et à le quantifier grâce à des mesures d’absorbances à 260 et à 280 nm. Cette ADN vas nous permettre de réaliser

perpendiculaire au gel ou bien par effet buvard. L'étape suivante consiste à incuber la membrane avec la sonde choisie : Pour l'ADN et l'ARN (Southern et Northern blots respectivement), c'est une molécule d'ADN radioactif de séquence choisie complémentaire à la séquence que l'on veut détecter. Pour les protéines (Western blot) la sonde est un anticorps reconnaissant spécifiquement la protéine désirée. On fait ensuite subir un lavage à la membrane afin d'éliminer les sondes

et Hamilton SMITH qui obtiendront le prix Nobel en 1978 : Ils découvrent les enzymes de restriction (endonucléases) permettant de découper l’ADN en petit segments à des endroits déterminés. Le clonage et le séquençage des gènes La technique de SOUTHERN BLOT Cette technique est très sensible et permet de reconnaitre un fragment d’ADN sur les milliers au départ. Elle permet aussi de faire la recherche simultanée chez plusieurs individus et de procurer une carte génétique d’une grande spécificité et

d’une lignée cellulaire et en testant la capacité des extraits cellulaires à transformer l’angiotensine I en angiotensine II et l’inhibition de cette activité par la chymostatine, un inhibiteur spécifique de l’activité chymase. Les études par Southern blot montrent que le gène codant pour cette nouvelle chymase est distinct des gènes codant pour les chymases déjà décrites. L’ARNm de RVCH n’est pas détectable par RT-PCR dans les tissus sains entiers, le poumon, le cœur, le rein ou bien le foie, mais

séparer des molécules en fonction de leur taille, préalable indispensable dans de multiples applications, notamment pour identifier des fragments d’ADN découpés par des enzymes, pour identifier un gène ou pour établir des empreintes génétiques par Southern Blot.  L’électrophorèse d’ADN sur gel d’agarose ne présente guère de difficultés techniques et peut être utilisée aisément en travaux pratiques tant à l’université qu’au lycée pour familiariser les étudiants avec cette technique essentielle. En conjonction

électrophorèse. L’ADN étant chargé négativement, elle migre de la cathode vers l’anode.Ensuite, l’ADN est transféré sous forme dénaturé (l’ADN double brin est coupé en 2 simples brins) du gel d’agarose sur une membrane de nylon par la méthode appelée "Southern Blot". Cette membrane est plongé dans une solution contenant une sonde (c’est un brin d’ADN synthétisé artificiellement) et subit une irradiation permettant de fixer des séquences d’ADN spécifiques sur la membrane. Elle est ensuite placée sur un film

restriction* pour découper l'ADN en fragments qui sont ensuite séparés en bandes par électrophorèse en gel d'agarose*. Ensuite, les bandes d'ADN sont transférées du gel d’électrophorèse sur une membrane de nylon par une technique appelée méthode de Southern blot*. La membrane de nylon recouverte des bandes de fragment d’ADN subit une irradiation qui fixe des séquences ADN spécifiques sur la membrane. l’ADN non fixée par les radiations est éliminée en lavant la menbrane. La membrane nylon avec les séquences