Substrat enzymatique

DETERMINATION DES CONSTANTES CINETIQUES DE LA REACTION 2.1. Compléter le tableau : Tube n° 1 2 3 4 5 1/[S]i en mmol.L-1 (*) 10 7,14 5 2,5 1,25 Absorbance (A) à 405 nm 1/Vi en µmol-1.L.min (**) * : les concentrations en substrat sont prises au début de la réaction enzymatique (mélange réactionnel avant addition de la solution d’arrêt). ** : 1/Vi = 6.10-6./A avec  en mol-1.L.cm 2.2. Tracer, sur papier millimétré, la courbe : 1/ Vi = f(1/[Si]). 2.3. Déterminer les constantes cinétiques, KM

lesquelles un acide aminé basique, la lysine ou l’arginine engage sa fonction acide. Elle coupe en C-terminal de ces acides aminés. Nous pouvons étudier ces paramètres cinétiques à partir d’un substrat synthétique : le chlorhydrate de benzyloxycarbonylarginyl-para-nitroanilide (Z-Arg-p-NA, HCL). L’hydrolyse de ce substrat par la trypsine libère un produit chromophore la p-nitroaniline. Celui-ci peut être dosé spectrophotométriquement à 420 nm. Grace à cette propriété, nous allons pouvoir mesurer la variation

Introduction 1 Matériel et Méthodes 5 Résulats 9 Observations microscopiques des fractions 9 Fractionnement cellulaire, matériel biologique et dosage protéique des fractions 10 Cinétique enzymatique 11 Gel d’électrophorèse 14 Discussion 16 CONCLUSION 20 Références 21 Annexe 1 : CINÉTIQUE ENZYMATIQUE : EXEMPLE DE CALCUL POUR L’EXTRAPOLATION POUR LES DONNÉES DE vmax, km et ki AVEC LE GRAPHIQUE 2 (P.12) 18 Table des tableaux et des figures Tableau I : Dosage des échantillons de fractions

manipulations, de calculer l’activité spécifique de l’uréase commerciale fournie et de la comparer avec la valeur donnée par le fournisseur, afin de vérifier la qualité de nos manipulations. L’activité enzymatique spécifique correspond à la quantité d’enzyme produisant la transformation d’une micromole de substrat par minute, normalisée par unité de masse : (µmole.min-1.mg-1). Dans un deuxième temps, nous étudierons la cinétique d’hydrolyse de l’urée par l’uréase sans effecteur, puis en faisant varier

d'analyse par réaction entre antigènes et anticorps et utilisant comme marqueur des enzymes. Principe: La technique ELISA (Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay) est une technique immuno-enzymatique de détection qui permet  de visualiser une réaction antigène-anticorps grâce à une réaction colorée produite par l'action sur un substrat d'une enzyme préalablement fixée à l'anticorps. Avantages de la technique: * L'utilisation d'anticorps monoclonaux rend la détection spécifique. * Possibilité de quantifier

expériences, la température, le pH, la concentration en substrat et en effecteur (galactose, méthyl- β-galactopyranoside), l’immobilisation ou non de l’enzyme ont permis de déterminer les conditions optimales d’utilisation de cette enzyme en particulier. Nous avons également identifié les méthodes de calculs graphiques les plus pertinentes dans le cadre de nos protocoles. A l’issue de cette étude, un pH, une température et différentes concentrations en substrat optimaux ont pu être dégagés ainsi que différents

Le tutorat est gratuit. Toutes reproductions ou vente sont interdites. Enzymologie : Calculs Résolution de QCM
Activité enzymatique • On constate après incubation de 30 minutes, en présence de 0,5 ml d’un sérum dilué 100 fois, une hydrolyse de 150 nmol de paranitrophénylphosphate, substrat de la phosphatase alcaline. L’activité phosphatase alcaline du sérum, exprimée en UI/L de sérum sera : 150 . 10-3 μmol x 100 (dilution !) AE = ------------------------------------------------ = 1000

de différentes quantités de substrats connus. Et pour connaître son pH optimum on dosera, toujours par spectrométrie, les produits apparus en présence d'une quantité fixe de substrats dans différents milieux alcalins de pH connus. Cette enzyme est très présente dans certains tissus comme les tissus osseux, muqueuse intestinale. On utilisera donc une phosphatase alcaline de mucus intestinal de veau. I.Étude cinétique Lors du dosage on utilisera comme substrat le p-nitrophényl phosphate (PNPP)

chimique et ainsi d'accélérer les réactions chimiques du métabolisme mais sans modifier l'équilibre formé. Les enzymes agissent à faible concentration et elles se retrouvent intactes en fin de réaction. Graphique : Diagramme de la catalyse enzymatique montrant la différence dans l'énergie d'activation dans une réaction non catalysée (rouge) ou catalysée (bleu). De plus, comme il est plus aisé d'atteindre un niveau énergétique inférieur, la réaction peut avoir lieu plus fréquemment, ce qui se

même phase. Le plus souvent le catalyseur et les réactifs sont en phase liquide ou gazeuse. Catalyse enzymatique. Les enzymes sont des catalyseurs biologiques. Elles jouent un rôle primordial chez les êtres vivants en accélérant les réactions chimiques du métabolisme. Ce sont des protéines. Les enzymes sont de plus en plus utilisées en industrie et au laboratoire. La catalyse enzymatique est efficace est sélective.