Substrat enzymatique

La structure de certaines enzymes est connue. Par la technique de la cristallographie aux rayons X, les scientifiques ont élaboré des modèles moléculaires de l’enzyme seule ou de l’enzyme avec son substrat. Problème : On cherche à comprendre les modalités de l’action de l’enzyme sur le substrat en étudiant un modèle présentant l’amylase et un petit fragment d’amidon. Mode opératoire N°1 : Visualisation du complexe Amylase/Amidon Colorer par chaîne puis afficher en Ruban pour observer la structure

Des enzymes à la fonction enzymatique retour accueil, nouveau cours 1èreS, plan du cours 1èreS Les hypothèses concernant le fonctionnement enzymatique seront présentées ici comme des données puisque le temps et le programme ne nous permet pas d'en faire l'étude expérimentale. Le propos de départ ici est d'étudier des produits de l'expression de l'information génétique (à replacer dans la page générale). Il ne faut pas considérer ce chapitre comme un cours de biologie sur les enzymes

réactions enzymatiques. I. Les caractéristiques des enzymes. Une enzyme est une protéine, elle est constituée d’une chaine d’acides aminés. Elle accélère les réactions chimiques au sein de l’organisme, c’est un catalyseur. L’enzyme possède deux spécificités, une spécificité de substrat car elle n’agit que sur un seul type de molécule et une spécificité d’action car elle ne catalyse qu’un seul type de réaction chimique. Au cours de la transformation, l’enzyme crée un complexe enzyme-substrat. L’enzyme

n°3 SVT Catalyse enzymatique et environnement Dans ce TP, nous allons étudier la relation enzyme-substrat et l'influence de l'environnement sur la catalyse enzymatique (action d'une enzyme sur une transformation chimique) . Nous savons d'une part que les enzymes sont des biocatalyseurs, c'est à dire des protéines produites par l'organisme. D'autre part, ces biocatalyseurs ont une double spécificité : -une enzyme donnée ne peut réagir qu'avec un seul substrat. -sur son substrat, une enzyme ne catalyse

d’étudier l’influence de la concentration en substrat et de la présence d’un inhibiteur sur la vitesse de réaction. Dans ce TP, nous allons utiliser une préparation commerciale de phosphatase alcaline de veau. Il s’agit d’une enzyme alcaline à 2 substrats, capable d’hydrolyser les monoesters phosphoriques selon la réaction suivante : R-O-PO3 2- + H2O R-OH + HPO4 2- II. Principe Afin de suivre la réaction enzymatique, nous allons réaliser un dosage spectrophotométrique

reconnaissance du substrat par l’enzyme TP 3 : La catalyse enzymatique (partie I) La courbe décrivant l’évolution de la vitesse initiale d’une réaction catalysée par une enzyme en fonction de la concentration du substrat présente un plateau de saturation. Celui-ci peut s’expliquer si le substrat se lie à l’enzyme et si, à partir d’une concentration donnée en substrat, tous les sites de liaison enzyme-substrat sont occupés par l’enzyme. La double spécificité enzymatique implique des interactions

concentration en enzyme et, dans la seconde, la concentration en substrat. * Action de la trypsine Pour comprendre le principe de ce TP, il est tout d’abord nécessaire d’appréhender son fonctionnement. C’est une enzyme qui contribue à la digestion des protéines alimentaires dans le pancréas en catalysant l’hydrolyse des liaisons peptidiques de 2 acides aminés : la lysine et de l’arginine. Elle agit également sur un substrat cinétique en clivant les liaisons du chlorhydrate de benzylocarbonylarginyl-para-nitroanilide

concentrations faibles de substrat, lorsque [S] >Km, V = Vmax et la vitesse est indépendante de la concentration de substrat. - La signification de la constante Km est évidente. Lorsque [S] = Km, V = Vmax/2. Km est la concentration de substrat nécessaire pour que 133 l'enzyme atteigne (1/2) Vmax. Méthodes graphiques pour la détermination de Km et Vmax Il y a deux régions d’utilité analytique dans la courbe cinétique de - [S] < 0.1Km (pour la quantification du substrat) Vo-[S]: - [S] > 10Km (pour

DEPARETEMENT DE BIOLOGIE TRAVAUX DIRIGES DE BIOCHIMIE SV(4) CINETIQUE ENZYMATIQUE 1) Que devient la valeur de la vitesse d’une réaction quand [S]= Km, 2Km, 4Km et nKm? 2) 2. Si la valeur de la vitesse maximale d’une réaction étant de 100 µmol/min et Km avec une valeur de 2mM, quelle sera la valeur de la vitesse de la réaction quand [S]= 2µM et 2M ? en déduire la zone qui délimitera les différents types d’ordre cinétique enzymatique. 3) L’étude de l’activité de la trypsine sur la carbobenzoxylysine

UI = µmol substrat/min Katal = mol substrat/sec AMS = mol substrat / (mol d’enz x sec) = k2 AS = AE / prot (mg) Facteur de purification = ASf/ASi → attention aux unités !!! → attention aux dilutions !!! AEf = AEi x Vi/Vf (Vi/Vf = facteur de dilution ex : dilution 1/50) le plus souvent on veut retrouver l’AE initiale, après avoir fait les mesures sur la solution diluée : e AEi = AEf x Vf/Vi ex : pour la dilution au 1/50 : AEi = AEf x 50 Résolution de QCM → Activité enzymatique • On constate