Thermus aquaticus

PolyAcrilamide Gel Electrophoresis SDS : Sodium Dodecylsulfate Sp. : espèce non précisée Spp. : plusieurs espèces non précisée STET : Saccharose, Tris, EDTA, Triton Subsp.: Sous esépce T°: Température T: Type TAE: Tris Acétate EDTA Taq : de Thermus aquaticus TE: TrisEDTA TEMED: Tétraméthyléthylènediamine TES : Tris EDTA Saccharose TCA : Acide Trichloroacétique STET : Saccharose Tris EDTA Triton TE : Tris EDTA U : unité UFC: unité formant colonie UNESCO : Organisation des Nations Unies pour l‘Education

réparation. Les polymérases réplicatives de cette famille comprennent notamment la polymérase du bactériophage T7 et l’ADN polymérase eucaryote γ. Parmi les ADN polymérases de réparation, on peut trouver l’ADN Polymérase I de E. coli, de Thermus aquaticus et de Bacillus stearothermophilus. Ces polymérases de réparation sont impliquées dans des processus de réparation par excision et dans la synthèse des fragments d’Okazaki du brin retardé lors de la réplication. Cette famille comprend essentiellement

l'échantillon d'ADN et d'autres ingrédients nécessaires à la réaction. Ces ingrédients supplémentaires englobent une bonne quantité de nucléotides (A, T, C et G), de courtes molécules d'ADN monocaténaire appelées amorces et un enzyme appelé polymérase Thermus aquaticus (polymérase Taq, en abrégé). La polymérase Taq est dérivée de bactéries qui vivent dans des sources chaudes et comptent parmi les rares enzymes capables de fonctionner à de très hautes températures. Le cycle commence lorsque la machine chauffe

il faut une amorce qui a un message génétique complémentaire. Or l’enzyme a besoin de dNTP et d’ion magnésium. Pour l’hybridation des amorces on repasse à 50°C puis on fait travailler l’ADN polymérase on utilisé l’ADN polymérase des bactéries thermus aquaticus qui vivent a 70°C afin d’accélérer la réaction. C’est la Taq polymérase. Et on recommence le cycle. Au bout de n cycle il y aura une amplification mais la distance doit être inférieur à quelques centaines de nucléotides. Elle sera donc augmentée

conscience est intervenu en 1988 avec l’invention d’une nouvelle technique appelée polymerase chain reaction (PCR), qui permet d’amplifier à volonté n’importe quelle région de l’ADN grâce à une enzyme isolée à partir d’une bactérie thermophile, Thermus aquaticus. Aujourd’hui, cette enzyme extrémophile (la taq-polymérase) est présente dans tous les laboratoires de biologies, où elle est utilisée aussi bien pour la recherche fondamentale que pour le diagnostic médical. QUESTION 16. Quel rapport établit

l’ADN-polymérase en utilisant les dNTP. Et le cycle recommence en dénaturant les deux brins à 95°C … Les ADN polymérases utilisées sont des enzymes thermostables isolées de bactéries thermophiles telles que la Taq Polymérase (= Polymérase de Thermus aquaticus) ou la Pfu Polymérase (Pyrococcus furiosus). Une séquence d’ADN peut-être amplifiée où qu’elle se trouve : sur un plasmide, sur un fragment d’ADN linéaire, sur l’ADN génomique. Une animation détaillant les différentes étapes de la PCR est également

restriction ci-dessous, proposez une méthode pour vérifier que la mutation a bien été réalisée. Enzyme EcoRI BamHI HindIII TaqI AluI BgIIII HaeIII HhaI PstI SmaI Source Escherichia coli Bacillus amyloliquefaciens Haemophilus influenzae Thermus aquaticus Arthrobacter luteus Bacillus globigi Haemophilus aegyptius Haemophilus haemolyticus Providencia stuartii Serratia marcescens Coupure 5'---G|AATTC---3' 3'---CTTAA|G---5' 5'---G|GATCC---3' 3'---CCTAG|G---5' 5'---A|AGCTT---3' 3'---TTCGA|A---5'

l’extrémité 3’OH). Exemple : Hae III : 5’ GG/CC 3’ 3’ CC/GG 5’ → → 5’ GG 3’ CC + + 5’CC 3’ 3’GG 5’ Le tableau II.1 ci-dessous donne la liste de quelques enzymes de restriction et leur sites de coupure. Micro-organisme Thermus aquaticus Sigle de l’enzyme TaqI Haemophilus haemolyticus HhaI Desulfovibrio desulfuricans DdeI Escherichia coli EcoRV EcoRI Providencia stuarti PstI Microcoleus MstII Nocardia otitidis-caviarum NotI Séquence

responsables de quelques erreurs à défaut d’activité d’édition : de l’ordre de 1 misappariement pour 1000 paires de bases. • • 2006 - 2007 Biologie génique - Pr A. Raisonnier 27/183 Les polymérases 2.9 Taq polymérase BG 10 • Thermus aquaticus est une bactérie thermophile des sources chaudes du parc de Yellowstone (Californie). Elle possède des enzymes thermorésistantes, dont une DNA polymérase (Taq polymérase) résistante à l’ébullition et active à 75-80 °C. La Taq polymérase est dépourvue

 Site reconnu Hæ III Hæmophilus ægyptus      Im G G C C C C G G     mI       Hpa II Hæmophilus parainfleuenzæ      Im          C C G G G G C C        mI Mbo I Moraxella bovis  I                   G A T C C T A G                    I Taq I Thermus aquaticus       I     m       T C G A A G C T    m     I Bam HI Bacillus amyloliquefaciens      I              m      G G A T C C C C T A G G    m               I Bgl II Bacillus globiggi I                   A G A T C T T C T A G A                    I