Thermus aquaticus

(100€) mais intéressant. e) Technique PCR = technique d’amplification de gènes. Amorces : 2 amorces Longueur 20 nucléotides Choix des amorces détermine le niveau de spécificité ADN polymérase (Taq) : Thermostable, t° opt = 72°C Extraite de Thermus aquaticus (bactérie thermophile) Pas fidèle : 1 erreur toutes les 2500 bases Cycle : Dénaturation à 95°C, 1 à 2 min Hybridation des amorces à 50-55°C, 1 à 2 min Extension des amorces à 72°C, 2 à 3 min Au bout de 30cycles -> taux d’amplification théorique

moins d’erreur d’appariement. Il est débarrassé de son activité correctrice 5’->3’ mais conserve l’activité polymérasique et l’activité correctrice 3’->5’. 1.4.6.4 Taq polymérase Enzyme extraite de la bactérie des sources hydrothermales (250°C) Thermus aquaticus. Enzyme thermostable souvent utilisée dans les amplifications d’ADN par PCR (modification de température (45à95°C, dénaturation hybridation …) réactions de séquençage. L’utilisation de la Taq polymérase en PCR, permet éviter amplifications

température Les bactéries peuvent être classées selon leur température optimale de croissance. - Bactéries mésophiles (Ex. : Escherichia coli) : température de croissance proche de celle du corps humain (37°C) - Bactéries thermophiles (Ex. : Thermus aquaticus) : températures de croissance comprises entre 45°C et 70°C . - Bactéries hyperthermophiles (Ex. : Archaea) : températures de croissance supérieures à 80°C . - Bactéries psychrophiles (Ex. : ) :Températures proches de 0°C (optimum à 10-15°C)

hyperthermophiles en divers points du Globe ! Des enzymes utilisés pour... a) Multiplier l’ADN. La bactérie : Thermus Aquaticus est une bactérie thermophile que l'on trouve souvent à proximité des sources d'eau chaudes. Cette bactérie aérobie et hétérotrophe évolue dans des températures comprises entre 50 et 80°C. < Octopus Pool, lieu de découverte de la bacterie Thermus Aquaticus. Cette bactérie sécrète un ADN polymérase actif sur une certaine gamme de température, avec un optimum d'efficacité

Hæmophilus ægyptus |      Im G G C C C C G G      mI       | Hpa II | Hæmophilus parainfleuenzæ |      Im          C C G G G G C C         mI | Mbo I | Moraxella bovis |  I                    G A T C C T A G                    I | Taq I | Thermus aquaticus |       I     m       T C G A A G C T    m     I | Bam HI | Bacillus amyloliquefaciens |      I              m      G G A T C C C C T A G G    m               I | Bgl II | Bacillus globiggi | I                   A G A T C T T C T A

synthèse qui diminue ce facteur ; il est de 1,8520 au lieu de 220 après 20 cycles d’amplification. L’amplification en chaîne est possible grâce à l’utilisation d’une polymérase particulière, la Taq polymérase, isolée d’une archaebactérie (Thermus aquaticus) capable de résister à des températures élevées et dont la température optimale d’activité est de l’ordre de 70 à 80 oC. Cette propriété est indispensable pour que toutes les étapes, dénaturation par le chauffage, hybridation des amorces et

inférieur | | Selon le Taxonomy Browser du NCBI[1] : Acidobacteria Actinobacteria Aquificae Bacterioidetes Chlamydiae Chlorobi Chloroflexi Chrysiogenetes Cyanobacteria Deferribacteres Deinococcus-Thermus Dictyoglomi Fibrobacteres Firmicutes Fusobacteria Gemmatimonadetes Nitrospira Planctomycetes Proteobacteria Spirochaetes Thermodesulfobacteria Thermomicrobia Thermotogae Verrucomicrobia Bacteria

Elles aiment la chaleur et le pH bas. On les trouve dans les source hydrothermales (80°C, pH=2) Les thermus aquaticus font partis de cette famille, elle jouent un rôle dans la PCR. PCR : réaction de polymérisation en chaîne. C’est le moyen de multiplier un bout d’ADN double brin. Dans la PCR on utilise une ADNpolymérase(enzyme qui catalyse la synthèse d’ADN) qui est la TAQ : thermus aquaticus. • Les sulfodépendantes sont celles qui ont un métabolisme lié au souffre, elles réduisent le souffre

polymérase à partir des amorces à 70-72°C (1-2 minutes). Cette technique a pris un essor considérable avec l’introduction d’une ADN polymérase résistante à la chaleur. Cette ADN polymérase ou Taq polymérase est extraite d’une bactérie thermophile (Thermus aquaticus). Elle permet une automatisation des différents cycles (dans des appareils appelés thermocycleurs). Le nombre de cycles est généralement compris entre 30 et 40. Cette méthode permet d’amplifier l’ADN compris entre les deux amorces d’un facteur

l’ARN ribosomique. Années 1980 : Craig Venter se lance dans l’exploration du génome humain et applique les premières techniques permettant de lire l’ADN, qu’il décode par séquences. En 1986 : Kary Mullis en utilisant une enzyme de la bactérie Thermus aquaticus invente la technologie de PCR (Polymerase Chain Réaction). Cette technique est devenue l’outil de base de la biologie moléculaire. En 1991 : création du Généthon à Evry, Fin 1992 : Daniel Cohen et Jean Weissenbach (Généthon) publient une première