Violette Baudelaire

classifier les deux types de bactéries présentes dans le yaourt, les lactobacilles et les streptocoques. On veut trouver, s’ils sont à Gram positif, ou négatif. 2) Matériel Matériel biologique - yaourt Matériel chimique - alcool (95%) - violet de gentiane - Lugol - Fuchsine - Eau distillée - Huile d’immersion Matériel physique - Lame/lamelle - Ensemenseur - Cristallisoir - 2 bâtonnets en verre - bec Bunsen - microscope - pipette 3) Déroulement de l’expérience D’abord

virage (pH) Couleur de l’acide Couleur de la base méthyl violet 0,1 – 2,6 jaune violet vert de méthyle 0,1 – 2,3 jaune bleu violet de méthyle 0,1 – 2,7 jaune violet rouge de crésol 0,2 – 1,8 rouge jaune cristal violet (ou violet de gentiane) 0,8 – 2,6 jaune bleu violet bleu de thymol (1er virage) 1,2 – 2,8 rouge jaune jaune de méthyle 2,9 – 4,0 rouge jaune bleu de bromophénol 3,0 – 4,6 jaune bleu violet rouge congo 3,0 – 5,2 bleu orange rouge orange de méthyle

de colorer les bactéries et de les distinguer à l'examen (le violet de gentiane (Gram +) ou la fuschine (couleur rose) (Gram -). Son avantage est de donner une information rapide sur les bactéries présentes dans un produit ou un milieu tant sur le type que sur la forme. Mode opératoire : * Réaliser un frottis  * Fixer la préparation à la flamme, puis laisser refroidir la lame. * Immerger les lames dans la solution de Violet de Gentiane pendant 1mm. * Immerger les lames dans du Lugol

milieux à ensemencer etc… Au terme du processus de coloration, les bactéries dites « Gram Négatives » apparaissent roses tandis que les bactéries dites « Gram Positives » sont colorés en bleu foncé/violet (rem : certaines bactéries telles que les Bacillus, apparaissent parfois roses et violettes sur le même frottis, on les dit « Gram labiles »  et les différences de coloration sont dues à des différences d’âge des bactéries) La coloration de Gram est une coloration qui teste l’alcoolo résistance

2-3-5-tétrazolium) permet d'obtenir les pigmentations suivantes : C. albicans : blanc (aspect crémeux) C. guilliermondii : rose-rouge C. krusei : blanc (aspect mat) C. parapsilosis, pseudotropicalis, pulcherrima et stellatoïdea : rose C. tropicalis : rouge-violet Gélose Columbia au sang * Usage : Utilisée pour la culture et l’isolement  de bactéries exigeantes n'ayant pas besoin de facteurs particuliers comme Streptococcus. * Composition et préparation : * Mélange spécial de peptones : 23 g

TP3 : Antibiogramme a) Identification du gram de la bactérie b) But et principe Préparer sur lamelle une coloration des Grams à l’aide de plusieurs solution : du violet de gentiane, du lugol, de l’éthanol à 70% et de la fuchsine de ziehl. Cette manipulation a pour but de révéler le type de gram de l’échantillon à tester et de savoir si ces souches sont des bacilles ou des coccis grâce à une observation au microscope. c) Résultats Le test de coloration de Gram révèle une coloration rose. J’en

lame entièrement séchée, la passer à la lame bleue du bec bunsen rapidement plusieurs fois pour fixer la préparation. Mode opératoire de la coloration: -Déposer quelque gouttes de cristal violet sur la préparation, laisser agir 30 secondes. -Déposer quelque gouttes de lugol sur le cristal violet, laisser agir 30 secondes. -Nettoyer la préparation à l'éthanol jusqu'à ce que le filet d'éthanol qui s'écoule de la lame soit transparent. -Rincer à l'eau. -Déposer quelque goutes de safranine

technique n°5 : Les colorations de Gram & au bleu de méthylène La coloration de Gram Principe : La coloration de Gram permet de distinguer les bactéries à Gram négatif qui apparaissent roses et les bactéries à Gram positif qui apparaissent violettes. Cette différence de coloration est liée à des différences de nature de la paroi bactérienne. Elle permet de renseigner sur : - le type Gram + ou Gram – ; - la forme des bactéries (coque, bacille) et autre détails morphologiques (extrémités

assez difficile à observer. Nous effectuons une coloration de Gram, colorant les bactéries Gram + en violet et les bactéries Gram – en rose par l’utilisation de plusieurs colorants et une différenciation à l’alcool-acétone au cours de la coloration. Les bactéries Gram + ont une paroi plus riche en peptidoglycane que la paroi d’une bactérie Gram – qui possède en plus une membrane externe. Le violet de gentiane colore toutes les bactéries et le lugol fixe ça. Intervient alors la différenciation, avec

pourvues d'une membrane externe supplémentaire. L’observation se fait au microscope optique à l’objectif x100 avec de l’huile à immersion. Principe des réactions biochimiques Le violet de gentiane traverse la paroi et les membranes des bactéries puis colore le cytoplasme. Le Lugol provoque une combinaison chimique entre le violet de gentiane et les composants cytoplasmiques des bactéries et fixe ainsi la coloration dans le cytoplasme. L’alcool traverse uniquement la paroi des bactéries gram – et décolore