Violette Szabo

Milieux sélectifs Chapman 75g/l NACl Cetrimide G grande colonie P P petite Colonie *Colorations de GRAM Fixation Violet de Gentiane 1 seul type de colonie G P halotolérante G cetrimide résistant *Coloration simple au violet Fixation Violet De Gentiane Lugol Décoloration P Coque G Bacille Par déduction : P Gram+ et G Gram- Safranin G Rose Gram – P Violet Gram + 

des filtrats - Eliminer le milieu de culture - Rincer avec 200 ml de PBS - Eliminer le PBS - Perméabiliser 5 min avec 80 ml de méthanol - Eliminer le méthanol et laisser sécher sous hotte - Mettre en contact 5 min avec 50 ml de cristal violet à 0.1% - Vider, rincer à l’eau distiller jusqu’à obtention d’une eau claire et laisser sécher - solubiliser dans 100 ml de déoxycholate de sodium à 2 % - Lire l’absorbance à 600 nm. II.2.1.c. Exploitation des résultats Les filtrats potentiellement

vrai que « le hasard ne favorise que les esprits préparés » comme aimait à le rappeler Pasteur. Dans une note de son article du 15 mars 1884 (Fig.1) pour “Fortschritte der Medicin”, HCJ Gram rapporte que des préparations colorées à l’aniline et au violet de gentiane sont totalement et rapidement décolorées par l’alcool après avoir été traitées avec de l’iode et de l’iodure de potassium. HCJ Gram ajoute : “j’avais essayé de faire une coloration double : sur des tissus de reins et sur des cylindres

pendant 10 à 15 secondes - noter les observations dans le tableau 3 Ajout de sel - prépare deux éprouvettes qui contiennent chacune 5 mL d’eau distillé, 1 goutte de solution aqueuse de Crystal violet 0.003M et 0,5mL de 1-butanol - agiter les deux éprouvettes jusqu’à ce que la couleur du cristal violet soit retrouvée dans les deux phases - ajouter du NaCl solide dans une des éprouvettes jusqu’à ce qu’un solide se forme dans le fond - agiter l’éprouvette pour dissoudre le sel - comparer la distribution

prélevé, afin de différencier et de classer les bactéries éventuellement présentes. 1) Préparation : - Frottis préalablement fixé sur lame ; - Recouvrir complètement la lame de violet de gentiane, puis laisser agir pendant tente (30) secondes ; - Une fois le délai écoulé, chasser le violet de gentiane avec du Lugol en recouvrant complètement la lame. Laisser agir pendant trente (30) secondes ; - Egoutter la solution et rincer à l’eau du robinet ; - Verser de l’alcool

direct par leur aptitude à fixer le violet de gentiane (Gram +) ou la fuschine (couleur rose) (Gram -). Son avantage est de donner une information rapide sur les bactéries présentes dans un produit ou un milieu tant sur le type que sur la forme. Mode opératoire : y y y y y y y y y y y Réaliser un frottis ou un étalement Fixer la préparation à la flamme, sécher soigneusement puis laisser refroidir la lame. Immerger les lames dans la solution de Violet de Gentiane pendant 1mm. Lavage à

L'affaire Violette Nozière Violette Nozière est une femme Française née le 11 Janvier 1915. A l'âge de 18 ans elle vit avec ses deux parents au 8, rue de Madagascar dans le 12ème arrondissements de Paris. Ses parents pensent que celle ci suit des cours dans un lycée et est une bonne élève cependant ses professeurs sont pas du tout du meme avis qui la décrivent comme « une élève paresseuse, sournoise, hypocrite et dévergondée. Un exemple déplorable pour ses camarades » mais en réalité elle

identification. En effet, le violet de gentiane se fixe sur des composants cytoplasmiques et après ce temps de coloration, toutes les bactéries sont violettes. Chez les bactéries à Gram négatif, la paroi, riche en lipides, laisse passer l'alcool (ou le mélange alcool + acétone) qui décolore le cytoplasme alors que, chez les bactéries à Gram positif, la paroi constitue une barrière imperméable à l'alcool et le cytoplasme demeure coloré en violet. Réactifs : - Violet de gentiane phénique - Lugol

Réalisation d’un frottis – Dépôt des bactéries sur la lame Réalisation d’un frottis – Séchage du frottis Réalisation d’un frottis – Fixation à l’alcool Réalisation d’un frottis – Flambage à l’alcool Coloration de GRAM – Coloration au violet de gentiane Coloration de GRAM – Mordançage au lugol Coloration de GRAM – Décoloration à l’alcool Coloration de GRAM – Coloration à fuchsine Coloration de GRAM – Séchage de la coloration V Manipulations : Premier jour 1) Prélèvement

classifier les deux types de bactéries présentes dans le yaourt, les lactobacilles et les streptocoques. On veut trouver, s’ils sont à Gram positif, ou négatif. 2) Matériel Matériel biologique - yaourt Matériel chimique - alcool (95%) - violet de gentiane - Lugol - Fuchsine - Eau distillée - Huile d’immersion Matériel physique - Lame/lamelle - Ensemenseur - Cristallisoir - 2 bâtonnets en verre - bec Bunsen - microscope - pipette 3) Déroulement de l’expérience D’abord