Cholesterol influence du regime alimentaire

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  • Publié le : 27 avril 2011
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Cholestérol et triglycérides : influence du régime alimentaire

I. Introduction

Le cholestérol sanguin correspond au cholestérol contenu dans les lipoprotéines. Il est principalement constitué de cholestérol HDL et LDL et faible quantité de cholestérol VLDL et les chylomicrons. Or ces dernières sont apportées au cours d'un repas donc étant donné que l'on va étudier la teneur encholestérol chez des êtres à jeun, on ne tiendra pas compte du cholestérol transporté dans ces chylomicrons. On négligera la quantité de cholestérol apporté par les VLDL car la quantité transportée est très faible. Les VLDL sont hydrolysés par une lipoprotéine lipase qui entraine la libération des triglycérides et du glycérol dans le sang. Cette dégradation des VLDL conduit à la formation de IDL puis de LDLcaractérisés par l’apo B. Les LDL amènent le cholestérol du foie vers les tissus,ce qui a un effet athérogène. Les HDL quant à eux transportent le cholestérol des tissus vers le foie et eux sont caractérisés par l’apo A.
Le but de ce TP est de mettre en évidence l’effet d’un régime riche en graisses et en saccharose sur la cholestérolémie et la triglycéridémie chez le rat.

II. ManipulationNous avons utilisés des rats ayant reçu pendant 4 semaines soit un régime contrôle soit un régime en graisses et saccharose (HF/HS) :
↓ ↓
Régime contrôle Régime gras
- Pas de Cholestérol - Graisses (22 %)
- Très peu d’acides gras saturés - Sucrose (25%)
- Tousles éléments nécessaires - Protéines (18-20%)
pour le développement
- acides gras poly et mono - Vitamines, minéraux et fibres sous forme
insaturés de cellulose
↓ ↓
Témoins T1 à T5Echantillons 8 à 11

Les graisses sont apportées par de l’huile de coco hydrogénée c'est-à-dire qu’elle contient des acides gras saturés qui bloquent l’activité des récepteurs LDL et donc augmentent la cholestérolémie. Au bout de 4 semaines, on prélève du sang auquel on ajoute un anticoagulant l’héparine. On centrifuge le mélange à 4000 tours/min pendant 10 minutes afin de récupérer le plasma qui est lesurnageant.

Dosage du cholestérol total :
Afin de doser le cholestérol plasmatique total, on a à notre disposition un kit enzymatique qui a pour rôle le maintien du pH à 7, pH auquel les enzymes présents dans ce kit, à savoir l' estérase, l'oxydase, le chromogène et la péroxydase, ont un fonctionnement optimal.
Dans les lipoprotéines, le cholestérol est essentiellement sous forme estérifiée(CE), mais il y a également du cholestérol libre (CL).
Le cholestérol estérifié réagit avec l’eau en présence d’une cholestérol estérase selon la réaction suivante :

Cholestérol estérase
CE + H2O → CL + AG
Puis, ce cholestérol libre formé ainsi que celui présent dans les lipoprotéines s’oxydent en présence d’une cholestérol oxydase selon la réaction :Cholestérol oxydase
CL + O2 → Cholesténone + H2O2
Enfin, le peroxyde d’hydrogène réagit avec le chromogène contenu dans le kit pour former un produit coloré qui pourra être dosé.
Peroxydase
Chromogène + H2O2 → Chromophore + H2O
Le chromogène est une substancesusceptible de se colorer, précurseur du chromophore. Ce dernier est un produit coloré rose, sa longueur d’onde maximale est à 500nm.
La concentration en chromophore sera donc proportionnelle à celle du cholestérol présent dans le plasma. Afin de déterminer la concentration en cholestérol, nous effectuons les préparations suivantes :
  | Blanc | Etalon | Témoin | Expérimental |
Eau | 20µL |...
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