Cytotoxicité

notification à l’ANSM (agence nationale de sécurité des médicaments et des produits de santé). Les effets indésirables graves sont déclarés à l’ANSM. III) Les tests in vitro Les tests in vitro ou méthodes alternatives permettent de quantifier la cytotoxicité (toxicité cellulaire) d’une substance ou l’intolérance d’un produit fini. Elles utilisent des cultures cellulaires, des cornes de bœuf, des œufs embryonnés et des morceaux de peau excisés. 1) Le test HET-CAM (Hen’s Eggs Test – chorioallantoïdic

l’action des cellules NK : Le tissu trophoblastique exprime dès les premiers jours suivant la fécondation, un type d’antigène de classe I non classique, appelé HLA-G. * les antigènes HLA-G sont reconnus par des récepteurs inhibiteurs de la cytotoxicité des NK, appelés KIR (pour killing inhibitory receptor), exprimés à la surface des cellules NK. * La protéine sHLA-G semble jouer un rôle dans l’élimination des lymphocytes T CD8 activés au niveau du site d’implantation. * Elle peut

uniquement marquées au PI PI Evaluation de la cytotoxicité d’un produit chimique  Altération membranaire marquage à l’Annexine V de la phosphatidylsérine Isoniazide (INH) et Paracétamol (AAP) : fort marquage à l’annexine  forte altération membranaire  Mesure de la chute du potentiel de membrane mitochondriale marquage au JC-1  fluo orange sur membrane à haut potentiel et passe au vert si chute du potentiel INH et AAP provoquent cytotoxicité  apoptose  virage de la fluorescence due

cible Les mêmes mécanismes sont utilisés avec une préférence pour l’un ou l’autre mécanisme selon les cellules :  ADCC ou  Cytotoxicité naturelle Mode de cytolyse (le mécanisme préféré de chaque cellule n’a pas été abordé en cours) ADCC Déclenchée par le pontage entre une Ig fixée sur le RFc sur NK (=CD16) et Ag membranaire (natif) sur la cible.  Cytotoxicité naturelle  Déclenchée par l’absence de CMH de classe I sur cellules cibles infectées ou tumorales.  inhibitition des KIR  dégranulation

. . . . . . . 58 2.3 Techniques de culture cellulaire . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 60 2.3.1 Lignée cellulaire et culture . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 60 2.3.2 Evaluation de la viabilité cellulaire : les différents tests de cytotoxicité . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 61 2.3.2.1 Le test MTT . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 61 2.3.2.2 Le test XTT . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 62 2.3.2.3 Le test au rouge neutre . . . . . .

des cellules infectées d'une souris de même espèce et on évalue la cytotoxicité (destruction des cellules de souris introduites par les cellules immunitaires présentes). |Cellules immunitaires prélevées dans le milieu 1 + cellules infectées d'une souris de la même espèce |Cytotoxicité observée | |Cellules immunitaires prélevées dans le milieu 2 + cellules infectées d'une souris de la même espèce |Pas de cytotoxicité observée | |Cellules immunitaires prélevées dans le milieu 3 + cellules

activés par des cibles exprimant le seul signal 1 (Cours de Janis Kuby Editeur DUNOD) Figure 22 : la cytotoxicité des T CD8 (Cours de Janis Kuby Editeur DUNOD) Pores de perforine en microscopie électronique Figure 23 : les molécules de perforine ouvrent des (pores) dans la membrane de la cellule cible (Cours de Janis Kuby Editeur DUNOD) Figure 24 : mécanismes de cytotoxicité: les molécules de granzyme passant dans la cible, et l’activation du récepteur de mort Fas par FasL induisent

reproductibilité des ScienceDirect : CurrentOpinioninChemicalBiology 2010 lots 5 L’art antérieur: le Mylotarg®  Mis sur le marché en 2000 et retiré en 2010  Anticorps monoclonal anti CD33 lié par une hydrazone à la calicheamicine (la cytotoxicité ≈ 4000x >doxorubicine)  Traitement des leucémies myéloides aigues  Inconvénients :  relativement instable en conditions physiologiques  composition hétérogène avec seulement 50% des anticorps monoclonaux conjugués Nature Biotechnology

de cytokines : IL-10, IL-4 et IL-5 Ces deux sous-populations de Th contrôlent et modulent la réponse immunitaire et pour un Ag donné, ils vont sélectionner le type de réactions qui vont être mise en jeu. VI. Cytotoxicité à médiation cellulaire (fig 9.6 p21) A. La cytotoxicité indépendante d’anticorps Il se manifeste par les cellules infectées par les virus et les cellules tumorales. Les cellules cytotoxiques sont les NK, K TCD8+ et les macrophages. Premier schéma : la cellule T cytotoxique

précédemment. Les carraghénanes utilisés ont été mis en solution dans du DMEM pour tous les dosages. Différentes expérience ont été réalisées dans cette étude in vitro : Un dosage en plaque Une titration des virus Une PCR quantitative Un dosage de la cytotoxicité Un dosage de l’activité anticoagulante Dosage en plaque Méthode : Des cellules ont été mise en culture dans des plaques à six puits. Puis lorsque les cellules sont arrivées à une forte concentration dans le milieu, celui-ci a été remplacé par