Northern blot

liées aux acides nucléiques Détection, caractérisation et identification des acides nucléiques Marquage et suivi des acides nucléiques Le marquage est principalement employé dans toutes les techniques qui utilisent une sonde (hybridation, Northern, …..). On distingue le marquage dit 'chaud' utilisant des isotopes radioactifs, et les marquages 'froids' qui utilisent des molécules aux propriétés fluorescentes, luminescentes. Ces dernières sont de plus en plus employées car plus pratiques.

des glucocorticoïdes dans la régulation de la glycémie, on réalise des expériences sur des souris sauvages et des souris mutantes dont le gène codant pour le récepteur des glucocorticoïdes a été inactivé dans les cellules de leur foie. Le Northern blot est une méthode de biologie moléculaire permettant l'analyse des ARN messagers. Les ARN messagers sont extraits de cellules, séparés par électrophorèse en fonction de leur taille puis détectés grâce à des sondes (séquences de nucléotides complémentaires

essential role in the regulation of glucose homeostasis and in the pathogenesis of type 2 diabetes mellitus. This study sought to determine the potential beneficial effect of putative antidiabetic medicinal plants used by the Eastern James Bay Cree of Northern Quebec (Canada) on the activity of key enzymes of gluconeogenesis and glycogen synthesis. Glucose-6-phosphatase (G6Pase) activity was measured by glucose oxidase enzymatic assay and glycogen synthase

Choix température * Transfert sur membrane Par capillarité Dénaturation par NaOH Fixation Lavage autoradiographie b-les autres types d’hybridation Hybridation de colonies bactériennes Puces à ADN L’ARN peut aussi être hybridé : northern blot L’hybridation sur puce pour réaliser la carte d’identité d’une tumeur 1 Créer des molécules d’ADN recombinant – vecteur de clonage Le phage M13 Filamenteux Pas de lyse bactérienne Infection par pilus sexuel par injection d’ADN sb Forme

en dehors des périodes « normales ». Le gêne mutant qui a muté a été appelé Constans (il intervient donc dans la réponse à la photopériode) • Pour mesurer le niveau d’expression = niveau de transcription de ce gêne on utilise la technique du Northern blot.  On réalise une électrophorèse pour séparer les ARNm selon leur taille (les plus petits migrent plus vite)  On utilise une sonde généralement radioactive pour repérer le gêne qui code pour Constans. La sonde est complémentaire à la séquence

Berg fait du clonage. Il associe deux séquences nucléotidiques, un gène avec un autre qui ne sont pas du même organisme donc on commence là à réorganiser l’ADN. - 1975 : Southern définit une méthode d’étude de l’ADN. La Southern blot, le western Blot ou le northern Blot. - 1983 : Mullis invente la PCR qui est une méthode d’amplification de n’importe quelle séquence nucléotidique dès qu’on en connaît les extrémités. - 2001 : La séquence du génome humain est publié dans Science et Nature donc on

de la digestion par BamHI et KpnI. Pour la première stratégie, on peut utiliser 1, 2 et 5 (ici le sens d’insère n’est pas important mais ce n’est pas toujours le cas). Pour la seconde stratégie, on peut utiliser toutes les colonies. 6° Northern Blot. On étudie des fragments d’ARN (on part de cellules et on les extrait) et on les sépare en fonction de leur taille suite à une migration sur un gel. On transfert le tout sur une membrane qui est hybridée avec une sonde (ici exon 3). On verra une

blood leukocytes or erythrocytes (Selkoe et al., 1988). Carboxylterminal immunoreactivity is found in human serum where there is an elevation in Down’s syndrome (Rumble et al., Alzheimer’s disease (AD)’ is an idiopathic progressive de- 1989). Northern blot analysis has detected mRNA in brain, mentia affecting a large proportion of our increasingly aged kidney, heart, spleen, pancreas, muscle, thymus, lung, adrenal population. Most people with Down’s syndrome after the age gland, small intestine,

in silico sont nécessaires, telles que des analyses de clustering pour regrouper les gènes présentant le même profil d'expression. Enfin, les résultats seront souvent confirmés gène par gène par des méthodes telles que la PCR quantitative ou le Northern Blot. Les puces apportent principalement des données qualitatives (variation d'expression d'un gène) mais il est difficile de quantifier avec précision l'expression d'un gène avec la technologie des puces à ADN. L'utilisation des puces à ADN connaît

réactions permettant de transformer des acides aminés en glucose au sein des cellules hépatiques. La protéine PEPCK permet d’obtenir du glucose par une autre voie que celle de la glycogénolyse dans le foie. Document 4 La réalisation d’un Northern blot obtenu à partir d’ARN messagers extraits de cellules hépatiques de souris sauvages nourries ou après 48 h de jeûne, ou de souris mutées pour le gène codant pour les récepteurs des glucocorticoïdes nourries ou après 48 h de jeûne ne montre aucune