Chapitre 2: Cinétique enzymatique.

1. Mesure des vitesses.
1.1 Méthodes (ou systèmes) discontinues.
Calcul de la vitesse de transformation d'un substrat sous l'action d'une enzyme.

1. Plusieurs mesures, la première le plus tôt possible de S et de P et on regarde ensuite graphiquement la variation des concentrations. La concentration varie linéairement. Il faut être sûr d'avoir des vitesses initiales.
2. Injection dans une colonne de chromatographie les prélèvements, le chromatogramme donne l'absorbance selon le volume. On peut construire ensuite le graphique de la variation de la concentration en fonction du temps, ce qui nous donne la vitesse.

1.2 Méthodes (ou systèmes) continues.
Mesurer en continue la concentration du substrat ou produit.

Mesure variation absorbance des enzymes qui permettra de mesurer des vitesses de réactions. Utilisation d'un spectrophotomètre qui mesure l'absorbance en fonction du temps.

Schéma reactionnel pas écouté

3. Equation de vitesse.
3.1 Hypothèse de l'équilibre.
La plus simple On part de l'observation de k1 et k-1 sont élevés par rapport à k kat
Provient de l'observation que l'etape E+S -> <- ES ont des constantes de valeurs élevées, donc elles vont se faire à des vitesses élevées. Quand on mélange l'enzyme et le substrat, on a rapidement des proportions fixes de S et ES. La vitesse d'apparition du produit P est constante. C'est ES qui contrôle la vitesse d'apparition du produit.
(voir photo cahier et photo diapo) la variation totale est faible.
Vm= vitesse maximale= vitesse limite= vitesse que l'on mesure pour les très fortes concentrations en substrat S, toutes les molécules d'enzymes auront fixé une molécule de substrat.
Pourquoi faire rapport v/vM?
Que signifie la valeur vM, qu'est ce que Ks?

3.2 Hypothèse de l'état stationnaire

on ecrit tjrs la même equation: v= kkat x (ES)
Ici, les constantes sont plus proches les unes des autres.

Km: concentration en substrat pour laquelle la vitesse sera la moitié de la vitesse