Agrobactérium Tumefaciens

pour les bactéries, notamment pour des gènes de résistance aux antibiotiques. L’intégration de plasmide bactérien au génome d'un organisme supérieur est limité à des bactéries spécifiques, et pour des couples d'espèces déterminés. Ainsi, Agrobacterium tumefaciens est une bactérie dont un fragment de son plasmide (l'ADN T) est capable d’entrer dans une cellule végétale et de s’intégrer à son génome. Dans le cadre de l'endosymbiose, un ensemble de processus évolutifs ont conduit à la formation d'organites

changement dans la sélection des plantes pour améliorer les plantes cultivées, mais l'introduction d'une technologie particulièrement puissante et précise pour faciliter sa mise en œuvre." 1973 : Identification du plasmide Ti dans la bactérie Agrobacterium tumefaciens. Ce plasmide permet d’accueillir le gène porteur du caractère recherché. 1980 : Le Premier brevet déposé sur un OGM est déposé aux Etats-Unis pour une bactérie capable de digérer les hydrocarbures. 1983: Premiers essais en laboratoire

une introduction directe de l'ADN d'un gène (dit gene d'interet) dans le noyau, souvent transporté pas un plasmide, mais sans autre intermediaire. Le transfert indirect, lui, est réalisé par l’intermédiaire de bactéries, comme par exemple Agrobacterium tumefaciens, qui permettent de véhiculer le gène d’intérêt. Il existe différentes techniques permettant le transfert direct , ces trois techniques sont l’électroporation, la micro-injection et la biolistique. L'électroporation : c'est une des

  On intègre alors le plasmide transformé dans une plante à l’aide d’une autre bactérie : Agrobacterium tumefaciens (A. tumefaciens), qui possède la capacité à introduire des fragments précis de son ADN dans le génome des plantes. Le plasmide est transféré de E. coli à A. tumefaciens par choc thermique ou par conjugaison. Enfin, on place dans un milieu de culture commun des bactéries A. tumefaciens et un fragment de tissu végétal (un morceau de feuille ou de tige par exemple). Grâce aux propriétés

symptômes caractéristiques facilement observable. En l'état, ceci se traduit par le dépérissement de la plante. [10] Au début du siècle, le phytopathologiste américain, Erwin Smith identifia l'agent de cette maladie : une bactérie du sol, Agrobacterium tumefaciens. Cette bactérie affecte naturellement les dicotylédones.[38] Entre 1960 et 1970, Georges Morel et ses collaborateurs de l'INRA de Versailles, ont montré que la tumeur induite par ces bactéries sur les plantes sensibles fait que

années 80 : le développement d’une technique d’insertion chez les végétaux La technique la plus fréquemment utilisée pour accomplir une transgénèse chez les végétaux, est le transfert du gène par l’entremise d’une bactérie du sol appelée Agrobacterium tumefaciens. Cette bactérie est utilisée comme véhicule du gène d’intérêt. C’est dans les années 80 que des chercheurs comprennent comment cette bactérie a la capacité de transférer son ADN dans le matériel génétique de certaines plantes. De nouvelles

du premier ADN recombinant grâce aux enzymes de restriction (une chimère non fonctionnelle de deux virus simien SV40). Pour ces travaux il reçut le prix Nobel de chimie en 1980. • 1973: Identification du plasmide Ti dans la bactérie Agrobacterium tumefaciens. Ce plasmide permet d'accueillir le gène porteur d'un caractère recherché, qu'il est en mesure d'introduire dans le génome d'une plante. S.Cohen et H.Boyer introduisent des gènes d’un amphibien dans une bactérie (E.coli) et obtiennent ainsi

dans l’agrobacteries, coculture pour transformation végétale et test d’activité enzymatique pour visualiser le présence du transgene.Le peuplier étant un modèle d’étude au laboratoire, il à été choisi comme organisme recepteur, l’agrobacterium tuméfaciens comme vecteur et le gène GUS comme transgène Jour 1 Diamètre de stérilité : 30cm Matériel nécessaire pour la conjugaison triparentale    Souche donneur Souche receveur Souche helper PTI désarmé Vecteur binaire Pmp90 A.tumefaciens(C28) Le peuplier

sont projetées en direction de l’explant à une vitesse très élevé. L’explant contient donc les gênes II. 2) Transfert indirect à l’aide d’une bactérie L’autre méthode couramment utilisé est celle du transfert à l’aide de la bactérie nommé Agrobacterium tumefaciens. Les gènes sont donc transférés sur cette bactérie. Cette dernière a une particularité spéciale, elle est capable de transférer son ADN aux cellules d’une plante lorsque ceux-ci sont mis en contact. Donc il suffit de mettre en contact l’explant

façon chimique avec le PCG (Poly Ethylène Glycol) ou électrique par électroporation (on fait passer un courant électrique dans une suspension de protoplastes). La transformation biologique : on introduit l’ADN à l’aide d’une bactérie agrobacterium tumefaciens. Elle infecte les plantes et forme une tumeur. La bactérie possède un plasmide où l’on a une zone qui peut s’intégrer dans l’ADN dans la plante par transfert, l’ADN T. On va éliminer l’ADN T avec des enzymes de restriction, on parle de plasmide