Électrophorèse

Phénylcétonurie : 1 / 15 000 naissances. Normes : 8 mg/l Bacillus subtilis + analogue de F Pathologie > 40 mg/l Test de Guthrie Caroline Moyret-Lalle © VI-Techniques d’analyse des acides aminés Séparation des acides aminés par électrophorèse Soumis à un champ électrique, les AA migrent vers l'électrode de polarité opposée : pH>pHi, l'acide aminé a une charge globale négative => électrode positive (anode) pH ne migre pas Dans un tampon de pH 6 Caroline Moyret-Lalle © Séparation

de son stage, le médecin stagiaire doit maitriser certaines techniques usuelles : - De laboratoire( confectionner et lire une goutte épaisse, réaliser une coloration de Ziehl pour le diagnostic de la Tuberculose, test hépatique, ionogramme, électrophorèse de l'hémoglobine, etc.) - De nursing (placer une sonde gastrique, urinaire, une perfusion, etc.) - De petite chirurgie (ponction lombaire, dénudation veineuse, laparoscopie, etc.) - De radiodiagnostic (radiographie standard du thorax

chromatographie liquide basse pression - Matériel pour chromatographie sur couche mince - Système de chromatographie en phase gazeuse - Systèmes de chromatographie liquide à haute performance (HPLC) et détecteurs associés - Appareillages et matériels pour électrophorèse sur gel - Modes opératoires - Temps imparti - Equipements de protection individuelle et collective - Valeurs et documents de référence - Echantillons biologiques - Kit chromatographique pour l’extraction d’acides nucléiques - Thermocycleur - Appareillage

analytiques Méthodes biochimiques Physiques Cytophotométrie Diffraction aux RX Cytophotométrie de flux Chimiques Fractionnement cellulaire Caractérisation Cytochimie Cytoenzymologie Immunocytochimie Ultracentrifugation Chromatographie Électrophorèse Spectrophotométrie Hybridation moléculaire 8 Étude du fonctionnement cellulaire Techniques expérimentales Cultures cellulaires Méthodes expérimentales Utilisation de marqueurs Utilisation de traceurs Micromanipulations 9

de protéines et de phénols a un rapport compris entre 1.9 et 2.1. Notre ARN n’a donc pas un bon degré de pureté. 3) Visualisation de l’intégrité des ARN sur gel et vérification de la sonde Cette étape consiste à faire migrer l’ARN par électrophorèse sur gel d’agarose à 0.8% afin de vérifier leur intégrité. Voici le plan de migration : | | | | | | |Marqueur de

optique : rouge neutre pour les vacuoles, violet dahlia ou cristal pour le noyau... Étude des constituants cellulaires Isolement de structures : par choc osmotique, ou grâce à des détergents puis par centrifugation. Purification de protéines : par électrophorèse, centrifugation, chromatographie, dialyse, etc. Numération des cellules Il est fréquent de devoir compter le nombre de cellules vivantes dans une boîte de culture et de le comparer au nombre de cellules total, par exemple pour déterminer la

le sérum et le sang coagulé ou l'on étudie : Urée, Créatinine, Acide Urique, Bilirubine, Calcium, Magnésium, Fer et Capacité totale de fixation de la transferrine, Phosphore, Cholestérol total et HDL, Triglycérides, Apolipoproteines A et B, Électrophorèse des protéines, Haptoglobine, CRP,Orosomucoïde, Transferine, Ferritine, IgG, IgA, IgM, Récepteur soluble de la transferrine, Albumine, GOT, GPT, Phosphatases Alcalines, Lipase, GGT, CPK et MB, Aldolase + Glycémie et Ionogram prélevés au laboratoire

s’accrochent. Il est donc nécessaire de confirmer un test positif par une autre méthode. b. Le Western Blot. On utilise des bandelettes test sur lesquelles différentes protéines (les antigènes) extraites du VIH-1 et VIH-2, ont été séparées par électrophorèse en fonction de leur masse moléculaire. Le sérum à tester est incubé au contact d’une bandelette test. Un témoin positif et un témoin négatif permettent les comparaisons. Si le sérum contient des anticorps spécifiques de protéines du VIH, ces Ac

puisse être réalisée, il faut qu’il soir supérieur ou égal à 1,5. La deuxième méthode est plus simple. Elle consiste à comparer l’échantillon d’ADN à analyser avec des échantillons témoins contenant un ADN de haut poids moléculaire. On réalise une électrophorèse sur gel d’agarose, dont nous expliquerons par la suite le principe. L’ADN de haut poids moléculaire migre d’un seul tenant qu’en cas de dégradation, l’ADN apparait sous forme fragmentée, étalée. D’autres contrôles peuvent également être réalisés

ils sont denses, et plus ils sont gros plus ils sont peu denses Caractéristiques structurales Expé ultracentrifugation de flottaison Les plus plus petits sont les plus denses et se retrouvent le plus au fond du tube Electrophorèse ATTENTION au cas particulier des VLDL Enzymes et protéines lipoprotéine lipase hydrolase qui coupe les TAG on la retrouve à la surface es cellules endothéliales grâce à l'héparane sulfate relargable par l'héparine