Endonucléase

est possible de vérifier la réussite du clonage grâce à deux techniques : technique d’extraction plasmidique et digestion par des endonucléases de restriction et la technique d’amplification PCR. ➢ L’extraction plasmidique va permettre de vérifier que la bactérie a bien été transformée par un vecteur plasmidique. Suite à l’extraction, une digestion par des endonucléases de restriction va permettre de vérifier que le fragment d’ADN ESR1 a bien été cloné dans le vecteur plasmidique pour donner la

italique. Le livre est écrit comme les versets de la Bible ce qui renvoie à l'utopie. Qu'est ce qu'une enzyme de restriction : Une enzyme de restriction est une enzyme qui coupe un double brin d'ADN en un point précis. On parle d'endonucléase XE "endonucléase" car elle coupe à l'intérieur au lieu de dégrader l'ADN à partir des extrémités libres (exonucléases XE "exonucléases" ). Ces enzymes ont été mises en évidence chez les bactéries et leur nom évoque le microorganisme dont elles sont extraites :

pGEX-IDH L’insertion/ligation du fragment IDH dans le plasmide pGEX-2T a nécessité que l’insert IDH et le vecteur soient clivés par les mêmes enzymes de restriction (ou compatibles). Le vecteur pGEX-2T présente déjà deux sites de coupure par les endonucléases à bouts cohésifs 5’ sortants BamHI et EcoRI juste en aval du gène codant pour la GST, protéine d’~ 26 KDa. Ces sites protéolytiques BamHI et EcoRI ont dû être créés de part et d’autre de l'insert IDH, par amplification PCR à l’aide de deux amorces

pGEX-IDH : L’insertion/ligation du fragment IDH dans le plasmide pGEX-2T a nécessité que l’insert IDH et le vecteur soient clivés par les mêmes enzymes de restriction (ou compatibles). Le vecteur pGEX-2T présente déjà deux sites de coupure par les endonucléases à bouts cohésifs 5’ sortants BamHI et EcoRI juste en aval du gène codant pour la GST, protéine d’~ 26 KDa. Ces sites protéolytiques BamHI et EcoRI ont dû être créés de part et d’autre de l'insert IDH, par amplification PCR à l’aide de deux amorces

Short( courtes) Palindromic Repeats ( répétitions d’ADN ).Complexe moleculaire crispcas9CRISPR-Cas9 est un complexe formé de 2 éléments : d’un côté, un brin d’ARN, de séquence homologue à celle de l’ADN que l’on veut exciser, et de l’autre, une endonucléase, les Cas9.Dans la cellule, le brin d’ARN va reconnaître la séquence homologue sur l’ADN et s’y placer. L’enzyme Cas9 se charge alors de couper la chaîne ADN complémentaire à ce brin ARN. Le trou laissé par le passage du CRISPR-Cas9 pourra alors

cliver des fragments d’ADN pour les insérer à un vecteur. Pour cela nous utilisons des enzymes de restriction qui sont des endonucléases bactériennes qui reconnaissent des séquences spécifiques de 4 à 8 paires de bases (le plus souvent palindromiques) sur l’ADN et le clivent sur les deux brins au niveau de ces sites. Les bactéries synthétisent et utilisent ces endonucléases pour se protéger des ADN étrangers qui peuvent les agresser. Nous utiliserons les enzymes EcoR1 (synthétisée par Escherichia

de résistance permet à une culture en présence d'ampicilline de sélectionner toutes les bactéries ayant incorporés BlueScript, que ce BleuScript contienne ou non l'insert ( le fragment d'adn phage lambda). Les enzymes de restrictions sont des endonucléases d'origine bactérienne et de véritables 'outils' utilisés en laboratoire pour pouvoir fragmenter l'adn. La coupure se fait en un site particulier reconnu par l'enzyme de restriction. Les séquences de nucléotides habituellement reconnues par les

reconnaissance d'une séquence spécifique. Moins il y a de nucléotides, moins la reconnaissance est spécifique, plus fréquente sera la coupure. Plus il y a de nucléotides, plus la reconnaissance est spécifique et donc rare. 34: Qu'est-ce qu'une endonucléase? 34: Une enzyme de restriction 35: Qu'est-ce que la DNA ligase? 35: De la colle moléculaire avec formation de liaisons covalentes 36 : Comment la bactérie reconnaît-elle l’ADN qu’elle doit couper (celui du phage) au sien ? 36 : La bactérie

réplication, les fragments nouvellement synthétisés sont réunis de façon à ce que l’extrémité 5’ de l’un des fragments soit liée à l’extrémité 3’ d’un autre fragment par l’action de : a. L’ADN polymérase b. L’ARN primase c. L’ADN ligase d. L’ADN endonucléase 6- La séquence des bases du brin d’ADN qui a servi de matrice pour la synthèse d’un ARN messager est AGCT. La séquence des bases trouvées dans cet ARN messager est : a. GCTA b. TCGA c. UACG d. UCGA 7- A propos de la chromatine, on peut énoncer

génome qui est sous forme d’ADN double brin linéaire, formé de 150000 à 280000 nucléotides et qui varie en taille de 150 à 280 kpb selon les espèces virales.  Mais cycliquement permuté (apparaît circulaire lors d’une cartographie par des endonucléases de restriction).  UNE VISION SIMPLISTE DE LA REDONDANCE PERMUTATION CYCLIQUE. TERMINALE ET BIOLOGIE MOLÉCULAIRE Les 120 putatifs ORF sont indiquées par des flèches blanches dans le premier cercle (anneau extérieur).  Du deuxième