Endonucléase

l'erreur. L'ADN polymérase remplace alors les nucléotides manquants par complémentarité avec le second brin. Plus de 130 enzymes réparatrices 2)Définition d’une mutation • On estime que les complexes enzymatiques appelés aussi des endonucléases corrigent 99.9% des erreurs. Il en existe 130 chez l’homme. • On appelle alors mutation, une modification de la molécule d’ADN qui a échappé aux processus de réparation. Lors des réplications ultérieures, la mutation peut se transmettre au

respiration cellulaire dont les catabolites toxiques comprennent les espèces réactives de l’oxygène ou ROS comme l’O2-. Ces ROS peuvent causer des dommages critiques à l’ADN s’ils ne sont pas réparés (Sengpiel et al, 1998). APE1 est une des principales endonucléases participant à ces réparations et on sait que son promoteur contient un site de liaison au facteur de transcription CREB. Cette étude consiste à déterminer si APE1 répare les dommages oxydatifs à l’ADN induit par le glutamate, dans les neurones

petits ~ 100-200 bases - 2 ADN polymérases pour synthèse : Pol et Pol (fidèle, vitesse 50 nucléotides/s) - Réplication discontinue (dissociation, reformation) - Nucléase FEN1, RNase H = élimine amorce ARN (voir diapo suivante) FEN1 = Flap EndoNuclease 1 IV – TERMINAISON DE LA REPLICATION 4.1 – Chez procaryotes Site ter : ‘’voie en unique’’ sens 10 séquences de 23 pb orientées en sens inverse. Site ter : protéine Tus (Terminator Utilization Substance), aide le réplisome de passer

de la réplication par correction épreuve Appareil réplicatif ADN ADN polymérase III: fidélité +++ ADN polymérase I, II Une erreur sur 109 à 1010 pb répliquées soit f = 10-6 par gène et par réplication. Au cours de la vie ADN Par excision: endonucléase UvrABC,… Elimination de lésions: alkyltransférase, photolyase… Par réparation post-réplicative Par recombinaison: RecA (recombinaison homologue) – SOS (activé par RecA) Enzymes qui dégradent mutagènes: catalase, oxydase (empêche la présence

d’erreurs appelé hybridation des brins dépendant de la synthèse (SDSA)  Utilisation de la chromatide sœur comme matrice pour garantir une réparation correcte La réparation par recombinaison homologue Dégradation des extrémités 5’ par une endonucléase Une chromatide sœur est disponible pour servir de matrice TYPES DE REPARATION Le destin des cellules 1.  Un état de dormance irréversible, connu sous le nom de sénescence 2.  Mort cellulaire programmée (apoptose) 3.  Une division cellulaire

« attendrissent » les protéines de la viande. Un objectif important de la biotechnologie alimentaire est le développement de nouvelles enzymes alimentaires améliorant la qualité de la transformation des aliments. * enzyme de restriction ou endonucléase de restriction : classe d’enzymes qui coupent l'ADN après avoir reconnu une séquence spécifique. Les trois types d’endonucléase de restriction sont : o enzyme inductible : enzyme qui est synthétisée uniquement en présence du substrat

plasmide qui migre donc dans la piste 2 serait donc la forme circulaire relâchée. Dans la forme linéaire les 2 brins d’ADN sont coupés, dans la forme circulaire dite relâchée un seul brin d’ADN est coupé. Les RNAases ont pour rôle d’agir comme des endonucléases, elles dégradent les ARN et donc purifient l’ADN. Ce qui permet à l’ADN de rester sous sa forme normale super-enroulée. Il est possible aussi de déterminer les formes de l’ADN en comparant les migrations des pistes 3 avec RNAse et 4 sans RNAse

plus loin) sont clonés dans des plasmides ou des phages d'insertion. 20 Chapitre III: ENZYME DE RESTRICTION, ÉLECTROPHORÈSE, CARTE DE RESTRICTION I. ENZYMES DE RESTRICTION 1. Définition et origine Les enzymes de restriction sont des endonucléases qui coupent d’une manière définie et reproductible l’ADN double-brin quelle que soit son origine. Elles ont permis de caractériser un génome entier en une série de fragments reproductibles. Les gènes ou fragments de gènes deviennent ainsi des

brin d’ADN « du site BamH I » dont les bases seront représentées par les lettres correspondantes, indiquer (à l’aide d’une flèche) quelle liaison est rompue sous l’action de l’enzyme BamH I. Axe de symétrie On rappelle que la spécificité des endonucléases de restriction est de : ! ! Reconnaitre des séquences de bases spécifiques dans la double hélice d’ADN - 4 à 15 paires de bases - usuellement des palidromes Cliver les deux brins du duplex en des endroits très spécifiques par hydrolyse de la liaison

Decrire l�factivite de quelques enzymes qui permettent l�fetude des acides nucleiques et etre capable de montrer l�feffet de ces enzymes sur un exemple detaille (sequence d�facide nucleique). Cet objectif comprend au moins les activites des endonucleases de restriction, les polymerases, les ligases et les topoisomerases. . Expliquer le mecanisme de l�famplification du DNA par PCR (il ne s�fagit pas des methodes ou des techniques, seulement du principe qui est utilise). . Expliquer le principe