Endonucléase

différence de potentiel entre les deux faces de la membrane interne Arrêt de la chaîne respiratoire et de la synthèse d’ATP Libération dans le cytosol de molécules apoptogènes et des facteurs qui activent les caspases. Ces enzymes activent des endonucléases nucléaires conduisant à la fragmentation de l’ADN qui est l’une des caractéristiques du phénomène d’apoptose. Apoptose : correspond à un suicide cellulaire, ou mort cellulaire programmée. Caspases : un groupe de protéases à cystéine qui

• Structure Les interférons alfa sont des petites protéines sécrétées par les macrophages. • Mode d’action - Cytokine, antiviral et immunomodulateur - Réponse spécifique en stimulant la synthèse IFN - Production de protéines (protéine kinase, endonucléase, phosphodiestérase) qui conduit à l’arrêt de la transcription d’ARNm (non spécifique), d’où une inhibition de la synthèse protéique et mort cellulaire. • Pharmacocinétique Dégradé par les enzymes digestives en raison de sa nature protéique (pas

métaux, des chocs thermiques ou encore certaines toxines agissent comme tel. Les signaux de terminaison de la transcription sont mal compris. Cependant, il existe une séquence consensus AAUAAA servant apparemment de signale pour qu’une ARN-endonucléase vienne coupé le transcrit en 3’. L’extrémité 3’ ainsi formé est polyadénylé dans le nucléoplasme. L’ARNpADNdep III qui transcrit les ARNt et les petits ARN reconnaît un promoteur à l’intérieur du gène. Mécanismes généraux de

40/183 Biologie génique - Pr A. Raisonnier 2006 - 2007 Les nucléases Chapitre 5 Les nucléases 2006 - 2007 Biologie génique - Pr A. Raisonnier 41/183 Les nucléases 5.1 Fragment de restriction (définition) BG 20 • • Les endonucléases de restriction sont des enzymes bactériennes participant à un mécanisme de défense des bactéries vis-à-vis des virus : système de restriction-méthylation. Elles catalysent la coupure de l’ADN non méthylé en des endroits caractérisés par une séquence

xeroderma pigmentosum cells, J. Biochem., 110, 667-674. Tanaka, K., M. Sekiguchi and Y. Okada (1975) Restoration of ultraviolet-induced unscheduled DNA synthesis of xeroderma pigmentosum cells by the concomitant treatment with bacteriophage T4 endonuclease and HVJ (Sendai virus), Proc. Natl. Acad. Sci. (USA), 72, 4071-4075. Tanaka, K., K. Kawai, Y. Kumahara, M. Ikenaga and Y. Okada (1981) Genetic complementation groups in Cockayne syndrome, Somat. Cell Genet., 7, 445-455. Tanaka, K., I. Satokata

l’influence de la concentration d’enzyme et de substrat sur la cinétique enzymatique de la Trypsine. II.PRINCIPE : La trypsine est une enzyme digestive du suc pancréatique qui a pour but de digérer les protéines. C’est une endonucléase qui hydrolyse les liaisons peptidiques dans lesquelles un acide aminé basique (lysine, arginine) engage sa fonction acide. Son activité enzymatique et son mécanisme d’action peuvent être étudiés à l’aide des substrats synthétiques comme le benzyloxycarbonylarginyl-para-nitroanilide

Il faut une transmission des séquence sans aucunes erreurs possible.  Système de réparation Mut : Grand nombre de mutation lorsque le système ne fonctionne  pas. Il contient 3 protéines :  – Mut S ( système qui reconnaît les mauvais appariement) – Mut H ( Endonucléase)  – Mut L ( protéine de jonction entre Mut S et Mut H et va servir de guide à Mut H)  Longueur : 200 nucléotides )  Mut S va reconnaître spécifiquement les zones de mésappariement.  On va faire venir Mut L  une fois Mut S fixé, Puis Mut L fixé on place Mut H dès qu'elle va être fixer

couple Xba I/ EcoRI Coupé par le couple Xba I /Pst I ADN plasmidique non coupé Tableau IV : différents couples d’enzymes dans les tubes Dans chaque tube est rajouté un tampon de restriction contenant : du Tris-HCl (pour pH=7,9), MgCl2 (cofacteur des endonucléase),NaCl (force saline),DTT(détruit les pont disulfure). 8 Analyse par électrophorèse des différentes digestions : Sur l’électrophorèse nous avons représenté la taille des fragments attendus après la digestion par les différents couples

correspondant à 500 pb, ce qui correspond bien à la taille du fragment attendu (calculé ci-dessus). 7. Digestion enzymatique par une enzyme de restriction du fragment d’ADN amplifié par PCR 7.1 Principe Les enzymes de restriction sont des endonucléases coupant de manière définie et reproductible l’ADN double-brin quelle que soit son origine. La propriété des enzymes de restriction de type II (comme celle qui sera utilisée) est, qu’une fois la séquence reconnue, l’enzyme coupe l’ADN au niveau

nouvelle espèce. Cette méthode doit toutefois restée combinée aux autres méthodes moléculaires. 5 1TS ABM 2014-2015 TAXONOMIE BACTERIENNE 2.2.4 LES PROFILS DE RESTRICTION (FIGURE 7) L’ADN des procaryotes peut être découpé par des endonucléases spécifiques appelées enzymes de restriction. Les séquences reconnues par les enzymes de restriction ont une taille de 4 à 8 nucléotides, elles sont en nombre limité dans une molécule d’ADN. Après coupure de l’ADN, les fragments générés peuvent