Endonucléase

de cette molécule, des fragments de tailles différentes dont la taille pourra être définie par électrophorèse. Les enzymes de restriction appartiennent à la classe des endonucléases, c’est-à-dire des enzymes capables de cliver les liaisons phosphodiester entre deux nucléotides à l’intérieur d’un acide nucléique. Les endonucléases se différencient des exonucléases qui dégradent la molécule d’ADN à partir de l’une de ses extrémités (3’ ou 5’). Séquences d’adn reconnues par les enzymes

enzyme d’intérêt, issu de Escherichia coli, et qui a subi comme dans le TP1 une sonification dans un tampon Tris-HCL mM de ph 8, afin de séparer par centrifugation le lysat des débris cellulaires. On incube également le sonicat bactérien avec une endonucléase de l'ADN : la DNAse I de microccocus, et on réalise une dialyse dans un tampon Tris-HCL 20mM, ph 8. Ces étapes sont nécessaires pour mener à bien notre purification, car la β-galactosidase se trouve dans un milieu à ph 8 et porte donc une charge

messagers matures. TRANSCRIPTION DES ARN RIBOSOMIQUES ARN pré-messager 5' exon 1 exon 2 exon 3 intron 1 intron 2 AAAA...AAAA 3' ARN messager 1 ARN messager 2 5' exon 1 exon 2 AAAA...AAAA 3' 5' exon 1 exon 3 AAAA...AAAA 3' : site de clivage des endonucléases spécifiques ARN pré-ribosomique 45S (13 000 nucléotides) 5' 3' ARNr 18S ARN 32S (2 500 nucléotides) 5' 3' 5' 3' ARNr 28S (4 800 nucléotides) ARNr 5,8S (160 nucléotides) 5' 3' 5' 3' ARN espaceur REGULATION DE LA TRANSCRIPTION PROCARYOTE Structure

souvent, les erreurs consécutives à la réplication sont réparées par des systèmes enzymatiques. A la suite de l’ADN Polymérase, des enzymes parcourent l’ADN à la recherche d’erreur (problèmes d’appariemment). En cas d’erreur, une seconde enzyme (endonucléase) clive le fragment présentant l’erreur et l’ADN Polymérase reforme le fragment qui vient d’être excisés par le système de réparation. 2- Réparation de l’ADN et régulation du cycle cellulaire La réparation des mutations est permise grâce au

comme la France ou l’Angleterre où la population est contre un fichier national des empreintes génétiques pour tous, considéré comme une violation de la propriété privée. Qu'est ce qu'une enzyme de restriction: Une enzyme de restriction est une endonucléase (coupe à l'intérieur de l'ADN) qui reconnait des séquences spécifiques (en palindrome) de 4 à 10 paires de base. LEXIQUE : Dactylogramme : Un Dactylogramme c'est une reproduction d'empreinte digitale. Crêtes papillaires : Dermatoglyphes :

cette structure est formée. Les signaux de début et de fin de transcription sont codés par la matrice d’ADN. Chez les eucaryotes, l’ARN est modifié après la transcription : Rajout d’un nucléotide coiffe en 5’ (stabilité de l’ARN) ARN clivé par une endonucléase qui reconnaît la séquence AAUAAA puis rajout d’une séquence de A en 3’ par une poly(A) polymérase. E. L’ARNt est une molécule adaptatrice dans la synthèse des protéines Un ARNt contient un site d’attachement à l’acide aminé et un site de reconnaissance

traduction Différents mécanismes de régulation antisens sont décrits chez les bactéries, l'ARN antisens en se fixant sur l'ARNm peut : masquer, pour le ribosome, le site d'initiation de la traduction engendrer une région double brin reconnue par une endonucléase qui clive et dégrade cette région faire office de terminateur Chez les Procaryotes: régulation de la traduction Les ARN antisens régulent également l'expression génique chez les Eucaryotes Un autre mécanisme de régulation de la transcription

Seulement 1500 pb peuvent être séquencés à la fois. Or, l'ADN génomique faisant 3,4 milliards de paires de bases, ne peut être séquencé en une seule fois --> doit donc être coupé en morceaux; et pour cela, on utilise des enzymes de restriction = endonucléases. Ces enzymes de restriction sont d'origine bactérienne et sont capables de cliver les liaisons phosphodiester entre les nucléotides au niveau de sites spécifiques. On peut aussi couper par la DNASE 1 de manière non spécifique. Pour le séquençage

compétence qui apparaît en fin de phase exponentielle de croissance lorsque le taux de nutriments diminue. Chez les bactéries à Gram positif, l'état de compétence nécessite l'apparition à la surface de la cellule d'un complexe protéique constitué d'une endonucléase, d'une exonucléase, de polypeptides capables de lier l'ADN et d'une autolysine. L'autolysine augmente la perméabilité cellulaire et permet au complexe protéique de gagner la surface cellulaire. L'ADN bicaténaire présent dans

d’un ADN normal pour permettre l’excision d’une séquence destinée à compléter une brèche d’un ADN dont les deux brins sont lésés irréversiblement. Deux systèmes permettent d'éliminer les lésions UV : * Le premier fait appel à une endonucléase (les endonucléases sont capables de couper au milieu de la chaîne d'ADN) spécifique qui coupe des dimères de pyrimidines (lorsque la cytosine ou la thymine sont empilées consécutivement sur le même brin et qui peuvent sous l'action des UV être reliées par