Génomique

Il y a de nombreux types d'ADN qui varient selon leur provenance, par exemple de l’ADN génomique, c’est-à-dire en provenance des chromosomes, ou bien de l’ADN plasmidique, c’est-à-dire provenant de plasmides (le plus souvent portés par des cellules bactériennes). Différentes variantes d'extraction sont utilisées en fonction de la provenance de l’ADN. Nous ne verrons ici que l'extraction de l'ADN génomique, seul porteur de l'information génétique. La «Polymerase Chain Reaction» ou PCR: La «Polymerase

de « floral dipping » …………… 3. Sélection de transformant ……………………………………………………… II. Isolement d’un mutant pif7 …………………………… 1) Introduction et rappels des lois de la génétique …………………………………… 2) Extraction d’ADN consiste à obtenir de l’ADN génomique ……………………… 3) Réaction en chaine par polymérase (PCR) ………………………………………… 4) Électrophorèses d’ADN sur gel d agarose …………………………………… 5) Résultats et interprétation …………………………………………………………. III. Conclusion ……………………………………………………. Annexe ……………………………………………………………

l’autoimmunité. Initialement, la diversité antigénique du HLA a été analysée en utilisant la technique de sérologie. Depuis l’avènement de la technique de PCR au milieu des années 1980, la diversité génétique a pu être étudiée au niveau de l’ADN génomique par des techniques de biologie moléculaire. Cet article propose un court rappel sur le système HLA et sa nomenclature, puis décrit les techniques utilisées en routine dans les laboratoires pour réaliser un typage HLA. © 2008 Société de réanimation

pronucleus d’ovocytes 2.5 Morula Transfection virale (transgenèse additive) 3.5 Blastocyste Transgénèse classique ou additive Seconde base: génétique moléculaire Construction transgénique = Transgène + Vecteur Transgène Natif ADN Génomique Chimérique ou de fusion Vecteur Amplification Transfert Virus Plasmide + Transgenèse Classique Principe Femelle (4-6 sem) Injection PMSG (follicules) J1 14h - 16h 46h d ’intervalle SUPEROVULATION Injection hCG (ovulation) Mâle

utilisant l’ADN génomique de la tomate cultivée (très proche de l’espèce S. lycopersicum var cerasiforme). Vous avez deux objectifs : Le premier est d’analyser la présence ou l’absence de ce retro-transposon au locus SlEZ2 chez différentes espèces de tomate, afin de déterminer le moment de son insertion dans la région promotrice de ce gène. Le second est de cloner ce rétro-tranposon dans un vecteur de clonage. 3 TP n° 1 : Extraction, analyse qualitative et quantitative de l’ADN génomique extrait des

séquence nucléotidique de l’ADN génomique après digestion par des enzymes de restriction. Une multitude de fragments d’ADN de tailles variables est générée par digestion enzymatique, puis séparée sur gel d’agarose et transférée par capillarité sous forme dénaturée sur une membrane de nylon. Cette membrane est mise en contact avec une solution contenant un fragment d’ADN ou sonde qui permet de repérer, par hybridation moléculaire, des fragments d’ADN génomique qui lui sont homologues. La différence

bourgeonnement. 10 3.3. L'acide nucléique Génome viral - Taille : 3 kb à 20 Kb -Séquences spécifiques codant de 1 à 30 protéines virales a. ADN génomique viral 11 Taille : 3 kb à 20 Kb – Séquences spécifiques codant de 1 à 30 protéines virales ARN messager et la traduction chez les virus 12 b. Les ARN génomiques viraux * Certains ARN monocaténaires peuvent être segmentés ; c'est le cas du virus grippal dont le génome est constitué de 8 segments d'ARN ce qui, peut

THEORIQUES INTRODUCTIONLes travaux pratiques de Génie Génétique sont une initiation aux modes de raisonnement et aux techniques utilisés en génie génétique. Ce fascicule regroupe les méthodes utilisées pour isoler un ADN génomique par PCR, cloner un amplicon chez Escherichia coli , purifier un plasmide recombinant et l’analyser par digestion avec des enzymes de restriction. Il présente l’une des deux méthodes de transformation bactérienne : la transformation

µM), 0,125 µl de dNTP (100 µM), 0,25 µl de Taq polymérase (Roche Applied Science, Meylan, France), eau qsp 25µl et 2 µl d’ADN génomique. Pour les PCR SHV, les réactions d’amplification ont été réalisées dans des mix de 50 µl, contenant 5 µl de tampon 10X MgCl2 (15mM), 5 µl de chaque amorce (2 µM), 0,25 µl de dNTP (100 µM), 0,5 µl de Taq polymérase et 4 µl d’ADN génomique. Les séquences des amorces utilisées et leur Tm sont indiqués dans le Tableau 1. Les conditions d’amplification étaient les suivantes :

expérience il faut séparer les bactéries du milieu de culture par centrifugation afin d’avoir uniquement les bactéries. Puis, plusieurs étapes sont nécessaires pour récupérer uniquement l’ADN plasmidique de ces bactéries car il faut déjà séparer l’ADN génomique, les ARNs, protéines…de l’ADN plasmidique. Ces étapes comprennent : -une re-suspension dans un tampon de suspension contenant du Tris-HCl (pour un pH=8), EDTA (chélateur d’ions divalents pour fragiliser la membrane), du Glucose (pour maintenir la