Microtube

d͛air suivante) : H2O2 H2 O + catalase ʹ (pas de réaction) catalase + (dégradation de H 2 O2 selon la réaction ½ O2 Résultat : Page | 11 3-5- Test sur galerie API 20E: 3-5-1- Présentation de la galerie : Galerie de 20 microtubes prêts à l͛emploi permettant de réaliser 20 tests biochimiques afin d͛identifier des bacilles Gram ʹ appartenant à la famille des ENTEROBACTERIACEAE. 3-5-2- Manipulation : - On choisit 1 colonie de la souche bactérienne à identifier ; - On la

Sabouraud | | Chapman | Chocolat | Sabouraud | ANC | | | | | | Sabouraud | 2- Galérie API 20 API 20 est un système standardisé pour l’identification des entérobactéries et autres bacilles à GRAM(-). Principe La galérie API 20 E comporte 20 microtubes contenant des substrats déshydratés. Les microbes sont inoculés avec une suspension bactérienne qui reconstitue les tests. Les réactions produites pendant la période d’incubation se traduisent par des virages colorés spontanés ou révélés par l’addition

d'un test positif présence de colonies rouges à centre noir avec un contour clair sur fond rouge. Alors que sur milieu Hektoën, elle se caractérise par la présence de colonies noires, avec un contour bleu-vert. La galerie Api 20E comporte 20 microtubes contenant des substrats sous forme déshydratée. Les tests sont inoculés avec une suspension bactérienne. Les réactions produites pendant la période d’incubation se traduisent par des virages colorés (avec ou sans ajout de réactifs). Les 20 tests

l’enseignant, de la manière suivante : une colonie isolée de bactérie E. coli est introduite dans 4 mL de milieu de culture avec de l’ampicilline (60 µg/mL), cultivée toute la nuit à 37°C sous agitation. 2 mL de culture sont ensuite transférés dans un microtube. Après centrifugation, le surnageant est éliminé et les 2 mL restants de la culture sont ajoutés aux cellules de la première centrifugation. L’opération est répétée une fois de plus et les tubes contenant la totalité des cellules des 4 mL de culture

pipettes compte goutte plastiques jetables graduées). Plaques de microtibration « qualité ELISA »-puits à fond plat. Cuvettes et papier absorbant pour recueillir les liquides de lavage. Petites pissettes pour conditionnement de tampon de lavage. Tubes, microtubes et portoirs pour conditionnement des réactifs et tampons. Etuve 37°C et réfrigérateur 4°C. 27 C22 Le PROTOCOLE Etape 1 C221 « Coating » de l’antigène On incube dans les puits la solution d’antigène spécifique de l’anticorps recherché. L’antigène

2.2. Identification Après l’isolement, les colonies caractéristiques des coliformes thermotolérants sont confirmées par les tests biochimiques : Galerie api 20E La galerie API 20E (Biomerieux- France) (photo 5), est constituée de 20 microtubes contenant des substrats sous forme déshydratée. Les tests sont inoculés avec une suspension bactérienne qui reconstitue les milieux. Les réactions produites pendant la période d’incubation se traduisent par des virages colorés spontanés ou révélés

partiel ou total (gênant parfois les lectures tardives) témoigne de la formation d’hydrogènesulfuré ; l’apparition de bulles dans le culot montre la formation de gaz à partir du glucose. Galerie API 20E : Principe : La galerie API 20E compote 20 microtubes contenant des substrats sous forme déshydratée. Les tests sont inoculés avec une suspension bactérienne qui reconstitue les milieux. Les réactions produites pendant la période d’incubation se traduisent par des virages colorés spontanées ou révélés

avec alcalinisation du milieu (virage de l’indicateur au bleu).  Citrate-négative : pas de culture (coloration verte de milieu inchangée) (Marshal et al., 2001). 7. API 20E (bio Mérieux) La galerie API 20E comporte 20 microtubes contenant des substrats déshydratés. Les microtubes sont inoculés avec une suspension bactérienne (prélever une seule colonie bien isolée sur milieu gélosé, et homogénéiser dans un tube contenant 5 ml d’eau physiologique). 61 Les réactions produites pendant la période

filtration sur gel. La réaction est obtenue et lue après centrifugation d’un micro-tube spécialement conçu, rempli de gel imprégné du réactif antiglobuline. La suspension de globules rouges à tester et le sérum- test sont déposés dans la cupule du microtube et centrifugés après incubation. Les globules rouges non agglutinés sont collectés au fond du micro-tube, tandis que les agglutinats sont retenus dans la hauteur de gel en fonction de leur taille. Leur position dans le gel détermine l’intensité de

dérivation Dans le cas de la dérivation d'un ou plusieurs micro-tubes provenant d’un multitube, on protège la ou les dérivations au moyen d'un boîtier assurant une protection mécanique, en chambre ou directement enterré. Figure 4.7 : dérivation de microtubes Le système de dérivation doit permettre de garantir un rayon de courbure minimal sur les micro-tubes : Diamètre extérieur micro-tube ∅ mm 5 8 10 Rayon de courbure minimum mm 60 200 240 Tableau 4.9 : rayons de courbure applicables