Plasmide

l’activation médiée par E2 de la voie de signalisation IGF-1R. Ils étudient si la phosphorylation de IGF-1R dans des cellules stimulées par E2 dépend de la présence des récepteurs oestrogènes. Les cellules COS7 sont transfectées sélectivement avec des plasmides codant pour ERα ou ERβ, puis sont stimulées de 0 à 60 min par 10-9 M de E2. La phosphorylation de IGF-1R est détectée par immunoprécipitation avec des anticorps anti-IGF-1R, puis Western blot utilisant des anticorps contre les résidus tyrosines phosphorylés

purification et clivage de la protéine de fusion Glutathion-S-transférase-Isocitrate déshydrogénase (GST-IDH), exprimée par le plasmide pGEX-IDH dans la souche transformée E. coli JM103/pGEX-IDH. (NB: pGEX est en réalité pGEX-2T). I. Détermination de la taille de l’insert IDH : * Construction du plasmide pGEX-IDH : L’insertion/ligation du fragment IDH dans le plasmide pGEX-2T a nécessité que l’insert IDH et le vecteur soient clivés par les mêmes enzymes de restriction (ou compatibles). Le vecteur

fabriquer un OGM. Nous allons nous intéresser à deux d’entres elles : la transfection biologique et l’éléctroporation. a) Technique directe : La transformation directe consiste en l'introduction dans l’ADN d'un gène véhiculé le plus souvent par un plasmide* classique, par le biais de techniques physico-chimiques. Il existe plusieurs techniques de transfert direct que nous allons citer : l’électroporation, la micro-injection et la biolistique. Nous allons en expliquer une seule. L’électroporation :

organisme d'origine. 2) La fabrication du plasmide : Les scientifiques doivent ensuite préparer un plasmide (voir illustration). On incorpore le gène d'intérêt préalablement récupéré dans ce dernier ainsi que deux autres gènes qui permettent de contrôler la transformation génétique; la plupart du temps, l'un sert à résister à un antibiotique A et l'autre à un herbicide. 3) L’incorporation du plasmide dans la bactérie : Une fois que le plasmide est prêt, on l'insère dans la bactérie,en incorporant

TCHAMDJA Samssoundine Chargé du cours: Dr TCHACONDO Tchadjobo SOMMAIRE INTRODUCTION I. Structure du matériel génétique a) L’ADN Eucaryote b) L’ADN Bactérien II. Organisation de l’ADN Bactérien et Eucaryote 1. ADN Bactérien  Les plasmides  Le nucléoϊde 2. ADN Eucaryote  ADN nucléaire  ADN mitochondrial  ADN plastidial III. Fonctionnement des ADN bactérien et Eucaryote 1) Comparaison de la réplication et de la structure des gènes entre les bactéries et les eucaryotes

d'organismes génétiquement modifiés. A – Différent mode de transfert des gènes : 1 – Le transfert direct : * Techniques de transfert direct : La transformation directe consiste en l'introduction dans l’ADN d'un gène véhiculé le plus souvent par un plasmide* classique, par le biais de techniques physico-chimiques. Il existe plusieurs techniques de transfert direct que nous allons expliciter : l’électroporation, la micro-injection et la biolistique. * L’électroporation : L'électroporation est une

IUP BIOINGENIERIE OPTION 1 2ème ANNEE Introduction A. Construction du vecteur pUT 807 I. Présentation des plasmides 1. Plasmide pUT 599 2. Plasmide pUT 654 3. Plasmide pUT 807 4. Intérêt du plasmide pUT 807 II. Principe des méthodes utilisées. 1. La PCR 2. Intérêt de la PCR et conditions opératoires 3. Réactions enzymatiques : restriction

Agrobactérium tumefasciens : bactérie tellurique qui héberge le plasmide Ti (Tumor inducing), responsable de la galle du collet. Tumeur Nécrose de la partie aérienne Mort de la plante Agrobactérium rhizogenes qui possède le plasmide Ri (pour root inducing) et provoque l’apparition d’un chevelu racinaire (ou Hairy root)  développement anormal de l’appareil racinaire. 2) Le plasmide Ti d’A. tumefasciens Le plasmide Ti contient plusieurs régions dont trois particulièrement importantes

Etude du clonage dans le plasmide pBluescript de l’ADN du phage lambda. Mots clés : Enzyme de restriction, EcoR1, HindIII, vecteur de clonage, ADN recombinant, plasmide, pBluescript, électrophorèse, transformation, LacZ, bactérie, phage lambda. Résumé : L’ADN peut faire l’objet de multiples travaux. Ici notre objectif est de cloner des morceaux de l’ADN du phage lambda dans le vecteur (plasmide) pBluescript. Pour se faire nous aurons recours à différentes techniques comme la digestion

enzyme de restriction • Des vecteurs de gènes, les plasmides bactériens sont des petites molécules d'ADN circulaire, très fréquentes chez les Bactéries. Par ouverture d'un plasmide par une enzyme de restriction, on peut fabriquer de l'ADN recombinant. Pour cela on prélève un gène intéressant chez une autre espèce par action de la même enzyme de restriction. Le fragment d'ADN (ou gène d'intérêt) obtenu est ensuite introduit dans le plasmide. Une ADN ligase, agissant comme de la colle, permet de