Precipitation Au Bacl2

étapes sont nécessaires : précipitation au BaCl₂, dialyse et chromatographie échangeuse d’ions. La dialyse pouvant durer plusieurs jours, seules les 2 autres étapes vont être réalisées dans ce TP. Deux notions importantes vont être abordées, tout d’abord une notion de rendement puis une notion de taux de pureté à partir des étapes de précipitation au BaCl2 et de purification par chromatographie échangeuse d’ions. En effet durant la première étape de précipitation au BaCl2 une mesure par spectrophotométrie

« S1 » Précipitation au BaCl2 Précipité « C1 » Surnageant « S2 » Précipitation au BaCl2 Précipité « C2 » Dialyse Fractionnement par précipitations au sulfate d'ammonium (entre 40 et 60%) et dialyse Précipité à 40% Surnageant à 60% Eluat < 0,1M NaCl Chromatographie échangeuse d'ions Eluat à 0,1M NaCl = Prothombine Echantillon « Pro » Test de stabilité de la Thrombine par dénaturation à l'urée Deux des étapes de purification de la prothrombine équine « précipitation au BaCl2

se déroule en grandes parties, la première est la purification de la prothrombine à l’aide de la précipitation au BaCl2 te de la chromatographie échangeuse d’ions , la deuxième partie à pour but de tester la stabilité de la thrombine par dénaturation à l’urée et fluorométrie. Dans cette première partie, nous avons mis en évidence la forte présence de thrombine dans le plasma, puis après précipitation et centrifugation nous avons constaté la présence de thrombine dans les culots et son absence dans

purification de la prothrombine issue du plasma de sang de cheval. La première étape consiste à séparer la prothrombine du plasma. Cette dernière s’entoure d’ions baryum au détriment des molécules d’eau et devient insoluble. Il s’agit de la précipitation au BaCl2. La deuxième étape est une chromatographie échangeuse d’ions sur une colonne Diéthyl-amino-ethyl(DEAE)-Sephadex A-50 chargée positivement avec une élution de la prothrombine grâce un gradient de NaCl. Un test enzymatique nous permettra

différentes : par précipitation au BaCl2 et par chromatographie échangeuse d'ion . Nous allons ensuite essayer de déterminer l'activité enzymatique de la prothrombine transformé en thrombine, sous l'action de l'écarine et grâce à un substrat chromogénique. II. Matériel et méthodes : '' précipitations au Chlorure de Baryum (BaCl2) : ces précipitations consistent à isoler du reste du plasma les protéines de prothrombine grâce à des centrifugation successives et à l'ajout de BaCl2 . Chaque protéine

coagulation sanguine. La purification de la prothrombine comporte normalement 3 étapes: précipitation au chlorure de baryum, dialyse et chromatographie échangeuse d'ions. Au cours de ce TP, nous avons pu réalisé que 2 de ces étapes: la précipitation et la chromatographie car l'étape de dialyse prend trop de temps. Durant la 1° étape, nous avons utilisé une méthode de précipitation au chlorure de baryum (BaCl2), ce qui nous a permis d’isoler de la prothrombine à partir de plasma sanguin. La dernière

Tp précipitation progressive But de l'expérience : Le but de cette expérience est de varier les volumes relatifs de réactifs et de vérifier grâce aux calculs théorique, mais aussi à la pratique que le réactif limitant est bien celui qui détermine la quantité de précipité produit. Méthode : Pour cette expérience Manipulation et résultats : Nous avons dans un premier temps, réaliser l'équation de la réation entre le carbonate de potassium et le chlorure de baryum qui est égale à :

Il s’agit ici d’un deuxième exemple de la méthode de précipitation utilisée pour la détection d’ions contenus dans une solutinon. Mais dans ce cas, la méthode est plutôt utilisée à des fins qualitatives que quantitatives. On peut prendre l’exemple de la détection de Fe2+ ou de Fe3+ dans une solution aqueuse

14g/l de BaCl2). Appareillage : Matériels courant de laboratoire et - Burette électronique. - Agitateur magnétique. - Barreau aimanté. - Balance. - Titrateur automatique. Mode opératoire : - Peser entre 5 et 10 g d'acide phosphorique dans un bêcher de 100 ml. - Ajouter .20 ml de solution sulfanazo III qui rend la solution violette. - Doser par une solution de Chlorure de Baryum sur un agitateur magnétique jusqu'à obtenir une coloration bleue pal. - noter le volume de Bacl2 versé V.

DOSAGES PAR PRECIPITATION Sommaire I - Objectifs II - Conclusions III - Principe 1- Méthode gravimétrique 2- Méthode volumétrique 3- Autre méthode IV - Résultats 1- Dosage par gravimétrique du baryum: 2- Dosage volumétriques des chlorures: V - Annexes 1- Données sur les produits 2- Mode opératoire réel 3- Préparation des différentes solutions nécessaires 4- Détail des calculs: I - Objectifs Le but de ce TP est de : - Effectuer un dosage gravimétrique du baryum