Solvant

Universitaire : 2008 - 2009 DEPARTEMENT DE CHIMIE Pr. SAFI Mohamed 2 LST-TACQ/ Dépt CHIMIE/ Pr. M. SAFI/ HPLC-08 SOMMAIRE I- INTRODUCTION II- PRINCIPE DE BASE DE LA CHROMATOGRAPHIE III- APPEREILLAGE 1) Réservoir de phase mobile et le traitement du solvant 2) Système de pompage 3) Dispositif d'injection de l'échantillon 4) Colonnes 5) Détecteurs a) Détecteur UV-Visible b) Détecteur spectrofluométrique c) Détecteur réfractométrique IV- PHASE MOBILE ET PHASE STATIONNAIRE 1) Phase mobile 2) Phase stationnaire

systématique aux dosages des protéines et de l’activité enzymatique. DIAPOSITIVE 10 : Etape 4 Traitement au chloroforme/éthanol En rajoutant des solvants organiques dans un milieu aqueux, une compétition va s’établir, les protéines sont réparties entre l’eau et les solvants. En déplaçant les molécules d’eau des zones hydrophiles des protéines, les solvants peuvent induire de nouvelles interactions, faisant plus ou moins précipiter les protéines. Il faut savoir que la purification de la SOD est facilitée

L'osmose est un phénomène de diffusion de la matière mis en évidence lorsque des molécules de solvant traversent une membrane semi-perméable séparant deux solutions dont les concentrations en soluté sont différentes ; le transfert de solvant se fait alors de la solution la moins concentrée (milieu hypotonique) vers la solution la plus concentrée (milieu hypertonique) jusqu'à l'équilibre (milieux isotoniques). Cette notion a permis de mieux comprendre le comportement des solutions aqueuses en chimie

Question 1 : Comment se nomme l’appareil avec lequel vous avez évaporé le solvant d’extraction? Cet appareil s’appelle le vaporisateur rotatif. Question 2 : En utilisant les données de solubilité de la caféine (consulter votre propre tableau complété lors de la préparation du laboratoire), calculez la valeur approximative du coefficient de partage du couple de solvants dichlorométhane/eau pour la caféine à l’aide de la formule que vous retrouverez dans le volume de Chavanne sous la section Coefficient

sortie de colonne HPLC, un spectrophotomètre en ligne réglé sur 272 nm. On propose le spectre d'une solution étalon de caféine à 0,02 g/L en solvant méthanol/eau 4/60 (v/v), contre le solvant, dans l’intervalle 230 nm – 400 nm. On propose aussi le spectre d’absorption du soda-cola fourni dilué au 1/10 en solvant méthanol/eau 4/60 (v/v), contre le solvant, dans l’intervalle 230 nm – 400 nm. Discussion : spectres annotés. C2. Réactifs et conditions opératoires générales pour les chromatographies

TP1 : Chimie organique – Séparation d’un mélange réactionnel - Manipulation : séparation d’un mélange de 0,5 g d’acide benzoïque et 0,5 g de benzanilide, on utilise les différences de solubilité des composés dans l’eau ou dans un solvant organique pour les séparer grâce à la technique d’extraction. Equation bilan : Tableau : Produit M (g.mol-1) m (g) n (mol) Nbr éq d V (Ml) Codes R/S Benzanilide 197,23 0,5 2,53 x 10-3 1,306 10 R22 : nocif en cas d’ingestion S22 : ne pas respirer les poussières

de l'éthanol  = 0,78 kg.L-1. masse molaire de l'éthanol M = 46 g.mol-1. réaction (mol) 3 C2H6O (aq) + 2 Cr2O72- (aq) + 16 H+ (aq) = 3 C2H4O2 (aq)+ 4 Cr3+ (aq)+ 11 H2O Etat initial excès excès solvant excès Etat intermédiaire solvant solvant Etat final EXERCICE n°3 : le fer. (5,5 points) Pour obtenir du fer métal à partir de minerai d'oxyde de fer (Fe2O3), on utilise la réaction avec le charbon (carbone) : 2 Fe2O3 + 3 C  4 Fe + 3 CO2 On fait réagir

mobile ΔP : perte de charge = différence de pression entre entrée et sortie de colonne = pression qu'il faut appliquer pour faire passer la φ mobile dans la colonne Solvants : éviter impuretés pouvant interférer avec détection ( solvants faible absorbance ) et poussières pouvant détériorer les pistons des pompes. Dégazage des solvants : pour éliminer les gaz dissous – filtration sous vide temporaire – sonification – barbotage – dégazeur en ligne Pompes : – mettre la φ mobile sous pression ( > 100

grâce à la possibilité de fabriquer des particules de très faible taille (3 - 10 µm) et de granulométrie homogène, qui permettait de réaliser des colonnes très efficaces impliquant la nécessité d'employer des pompes à haute pression pour pousser les solvants (et des tubes résistants pour y mettre les phases stationnaires). Dans un premier temps, nous présenterons le principe et l’appareillage de l’HPLC ainsi les différents modes de séparation. Nous développerons les notions fondamentales et nous finirons

par évaporation : l'évaporation du solvant provoque l'augmentation de la concentration du produit en solution ce qui induit sa cristallisation. C'est cette méthode qui est utilisée dans les marais salants, cristallisation par relargage : l'addition d'un sel ou d'un contre-solvant (qui ne dissout pas ou peu le produit à cristalliser) miscible avec le solvant provoque le relargage du produit en solution ce qui induit sa cristallisation. Idéalement, le contre-solvant solubilise les impuretés. La cristallisation