Séphadex

réaction d’amplification de pré-séquençage a été réalisée avec le kit de séquençage BigDye® Terminator v3.1 (Applied Biosystems, Courtaboeuf, France) selon les recommandations du fabricant. Les produits ainsi obtenus ont été purifiés sur colonne SEPHADEX G50 (Amersham Biosciences, Pantin, France) puis séquencés. Les chromatogrammes obtenus ont été visualisés et vérifiés avec le logiciel Chromas 2.0.1. Les séquences ont été alignées en utilisant le programme ClustalW (http://www.genome.jp/tools/clustalw/)

fin de l’incubation qu’il est marqué par le tritium ; b- si on incube l’enzyme avec l’acétoacétyl-CoA seul, marqué par le tritium sur le reste acétoacétyl seulement, on peut réisoler l’enzyme à la fin de l’incubation par passage sur colonne de Sephadex. L’enzyme réisolée ne porte pas de radioactivité. Si on la met en présence de 3H-succinate on obtient la formation de succinyl-CoA tritié. Conclusions ? 2ème Exercice La créatine kinase du muscle catalyse, en présence de Mg2+, la réaction (1)

Collas – UCO Bretagne Nord 33 Biochimie structurale Peptides Détermination de la masse moléculaire. Les masses moléculaires peuvent varier de 10 000 à plus de 1 000 000. Filtration sur gel de dextrane. Les gels utilisés sont de type Sephadex. Ce sont des polymères glucidiques synthétiques ayant des liaisons croisées. Ces liaisons déterminent une certaine porosité. On parle de tamisage moléculaire : les plus grosses molécules, exclues du gel, passent rapidement, tandis que les plus

Collas – UCO Bretagne Nord 33 Biochimie structurale Détermination de la masse moléculaire. Les masses moléculaires peuvent varier de 10 000 à plus de 1 000 000. Filtration sur gel de dextrane. Peptides Les gels utilisés sont de type Sephadex. Ce sont des polymères glucidiques synthétiques ayant des liaisons croisées. Ces liaisons déterminent une certaine porosité. On parle de tamisage moléculaire : les plus grosses molécules, exclues du gel, passent rapidement, tandis que les plus petites

resin with 20 ml of 20 mM MOPS pH 7.5 - 5 mM imidazole and a second wash with 20 ml of 20 mM MOPS pH 7.5 - 60 mM Imidazole, the bound proteins were eluted with 500 mM imidazole, pH 7. Imidazole was eliminated by size exclusion chromatography on a Sephadex G-25M columns (GE Healthcare) equilibrated with 20 ml of 20 mM MOPS pH 7.5. The eluted fractions were concentrated using a 10 kDa Centriprep (Millipore); protein concentrations were determined using a Bio-Rad Protein Assay Kit (Bio-Rad) and aliquoted

diamètre et leur volume total est de 16 l. Cinq unités de ce type en série donnent la même résolution qu’une colonne de 75 cm de longueur. Les polymères les plus utilisés dans ce type de séparation sont indiqués dans la tableau 13. nom commercial Séphadex Séphacryl Sépharose Sépharose CL pH :domaine stabilité polymère dextrane dextrane/acrylamide agarose agarose réticulé d'emploi (temp.°C) stabilité solvants sels chaotropiques I = instable biodégradable stable instable