Bacterliologie

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Bactériologie

Milieux de culture
Gélose CLED (Cystine Lactose Electrolyte Déficient)
* Usage :
Utilisé dans l'étude des bactéries contenues dans l'urine. C’est un milieu non sélectif, de nombreuses bactéries, tant Gram + que Gram -, pourront se développer. L’absence d’électrolytes (pas de NaCl) limite le phénomène d’envahissement par les Proteus.
(Surtout utilisé en coproculture)
*Composition et préparation :
* peptone : 4 g
* extrait de viande : 3 g
* peptone pepsique de viande : 4 g
* L-cystine : 0,128 g
* lactose : 10 g
* bleu de bromothymol : 0,02 g
* agar : 13 g
* pH = 7,3
34,2 g par litre.
Stérilisation classique.
* Lecture :
Elle s’effectue après 18 à 24h d’incubation à 37°C
Colonies jaunes : lactose +
Colonies bleues ouvertes : lactose -

Gélose SS (Salmonella Shigella)
* Usage :
Utilisée pour l’isolement des salmonelles et des shigelles dans les produits alimentaires ainsi que dans les autres prélèvements susceptibles d’en contenir, après enrichissement préalable. (Surtout utilisé en coproculture)
* Composition et préparation :
* peptone : 5 g
* extrait de viande : 5 g
* lactose : 10 g
*citrate de sodium : 10 g
* citrate de fer III : 1 g
* sels biliaires : 8,5 g
* vert brillant : 3,3 g
* rouge neutre : 0,025 g
* thiosulfate de sodium : 8,5 g
* agar : 12 g
* pH = 7,3
63 g de poudre dissous par ébullition.
Se reporter à la notice en raison de variations de la composition (formule moins inhibitrice des Shigella à 5,5 g de sels biliaires par exemple).NE PAS AUTOCLAVER
* Lecture :
Lac - : colonies incolores
Lac + : colonies rouges
Centre noir : H2S +
Pas de centre noir : H2S –

Gélose Chapman
* Usage :
Utilisée en microbiologie médicale, permettant la croissance des germes halophiles. Parmi ces germes figurent au premier rang les bactéries du genre Staphylococcus, mais aussi les Micrococcus, les Enterococcus, les Bacillus, et derares bactéries à Gram négatif.
* Composition et préparation :
* peptone : 10 g
* extrait de viande de bœuf : 1 g
* chlorure de sodium : 75 g
* mannitol : 10 g
* rouge de phénol : 0,0 25 g
* agar-agar : 15 g
* eau distillée qsp 1 litre
* pH = 7,4
111 g par litre de milieu.
Autoclavage classique.
* Lecture :
Virage au jaune du milieu : mannitol +
Pas devirage : mannitol –

Gélose de Sabouraud
* Usage :
Utilisée pour l'isolement des Fungi (moisissures et levures) saprophytes ou pathogènes. Elle est recommandée essentiellement pour l'isolement des moisissures dans les prélèvements peu chargés en bactéries.
* Composition et préparation :
* peptone de caséine et de viande : 10 g
* glucose monohydraté : 40 g
* agar : 15g
* eau distillée qsp 1 L
* pH = 5,6
65 g de poudre dans un litre d'eau distillée.
Autoclavage 15 minutes à 121°C.
* Lecture :
L'utilisation du TTC (triphényl 2-3-5-tétrazolium) permet d'obtenir les pigmentations suivantes :
C. albicans : blanc (aspect crémeux)
C. guilliermondii : rose-rouge
C. krusei : blanc (aspect mat)
C. parapsilosis, pseudotropicalis, pulcherrimaet
stellatoïdea : rose
C. tropicalis : rouge-violet

Gélose Columbia au sang
* Usage :
Utilisée pour la culture et l’isolement  de bactéries exigeantes n'ayant pas besoin de facteurs particuliers comme Streptococcus.
* Composition et préparation :
* Mélange spécial de peptones : 23 g
* amidon : 1 g
* chlorure de sodium : 5 g
* agar : 10 g
* sang : 50 ml
* pH= 7,3
42,5 g par litre.
Stérilisation classique.
Le sang est ajouté stérilement dans le milieu stérile en surfusion.
(On peut réaliser une gélose au sang cuit si le milieu est maintenu à 75-80 °C)
* Lecture :
Colonies entourées d'un halo clair : béta-hémolyse (hémolyse totale)
Colonies entourées d'un halo verdâtre : alpha-hémolyse (hémolyse partielle)
Autres colonies : gamma-hémolyse...
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