Absorbance

76 724 200 1 23 92 708 200 1 25 100 700 200 1 Absorbance de la gamme BSA pour la courbe étalon Extrait BSA BSA BSA BSA BSA BSA BSA BSA BSA BSA Quantité ( µl) 0 0 8 20 32 44 60 76 92 100 Absorbance Absorbance des extraits et poids déterminé grâce à la courbe étalon Extrait EBWT EBWT EBWT EBOGM EBOGM EBOGM Dialysat Dialysat Dialysat FRP Dilution x10 x10 x10 x10 x10 x10 x10 x10 x10 0 Quantité (µl) 80 150 200 80 150 200 110 150 190 110 Absorbance 0,34 0,6 0,76 0,28 0,51 0,64 0,52 0,7 0,84 0,16

forme log10IO/I= εlC IO et I :intensités de la radiation incidente et transmise respectivement C : la concentration molaire, mol.l-1 ε le coefficient d’extinction molaire, l. mol-1.cm-1 l : épaisseur de la cuve en cm * Terme log10IO/I : absorbance, représentée par le symbole A A = εlC * ε constante à une longueur λ donnée pour une espèce donnée ε ( λ) * ε indépendant de la concentration des espèces absorbantes. On trace A = f(c) pour une solution témoin , à partir de solutions de

lors de la lecture au spéctrophotomètre, d'ajuster le zéro de DO. Cela nous permettra de prendre les mesures d' absorbance à 550 nm (le cytochrome C cède ses électrons à une longueur d'onde de 550 nm) des cuves 2 et 3, toutes les trente secondes. RESULTATS: Mesure d'activité "succinate cytochrome C réductase" au niveau des mitochondries A=f(tps) Absorbance (cuve 2) Absorbance (cuve 3) 1 0,9 0,8 0,7 A (550nm) 0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0 0 0,5 1 1,5 2 2,2 3 3,2 4 4,5 5 5,5 6 6,5 7 7,5

6 0,8 1 Volume d’eau (mL) 1 0,8 0,6 0,4 0,2 0 Concentration Bleu Patenté ( )𝑔. 𝐿−1 0 0,04 0,08 0,12 0,16 0,2 Absorbance mesurée 0 0,123 0,275 0,392 0,600 0,647 + Sirop de menthe = 1 mL avec une absorbance de 1, qui est une valeur hors gamme. Donc on effectue une dilution au = 0,1 mL de menthe et 0,9 mL de diluant, l’eau (car 1-0,1 =1 10 0,9). Son absorbance mesurée est de 0,394. 8. Vous allez mesurer l’absorbance des cuves de votre gamme étalon.A quelle longueur d’onde allez vous

Amélange = Absorbance d’une solution qui contient les deux formes (HIn et In-) de l’indicateur à l’équilibre AHIn = Absorbance d’une solution qui contient uniquement la forme HIn de l’indicateur à l’équilibre AIn- = Absorbance d’une solution qui contient uniquement la forme In- de l’indicateur à l’équilibre Résultats expérimentaux et calculs Tableau 1 : Détermination de la constante de dissociation de l’indicateur bleu de bromophénol Solutions Couleur pH Absorbance à 591

selon le tableau ci-dessous : Tube n° 0 1 2 3 4 5 Solution de PNP à 0,1 mmol.L-1 (en mL) 0 1 2 3 4 5 Tampon pH = 9,8 (en mL) 5 4 3 2 1 0 Solution d’hydroxyde de sodium à 2,5 mol.L-1 (en mL) 1 1 1 1 1 1 Eau distillée (en mL) 4 4 4 4 4 4 Lire les absorbances à 405 nm. 2. DETERMINATION DES CONSTANTES CINETIQUES DE LA REACTION Opérer comme indiqué dans le tableau ci-dessous : Tube n° 1’ 2’ 3’ 4’ 5’ Solution de PNPP à 1 mmmol.L-1 (en mL) 0,5 0,7 1 2 4 Tampon pH = 9,8 (en mL) 3,5 3,3 3 2 0 Préincuber

traverse la solution est appelé spectre d’absorption. La longueur d’onde λ qui correspond à l’absorbance maximale est la longueur d’onde de la radiation dont la couleur est complémentaire de celle de la solution. I. Loi de Beer-Lambert A: absorbance de la solution (sans unité) l: épaisseur de solution traversée (en cm) c: concentration molaire de la solution (en mol.L-1) ελ:coefficient d'absorption molaire (en L.mol-1.cm-1) ελ dépend de l'espèce chimique en solution, de la longueur

analyse au spectrophotomètre : tabl 1 : absorbances des différentes fractions. Après lavage et élution de la colonne, nous avons recueilli 25 fractions: les 5 premières fractions correspondent au 5ml de tampon de lavage ( n°1 à n°5), les 5 suivantes au 5 ml de tampon avec NaCl à 0,3M (n°6 à n°10), les 5 suivantes au 5ml de tampon avec NaCl à 0,4M (n°11 à n°15) et enfin les 10 dernières au 10ml de tampon avec 0,5M de NaCl (n°16 à n°25): fig 3 : absorbances des différentes fractions On note que

doser les protéines par spectrophotométrie. Spectrophotométrie A l’aide d’un spectrophotomètre, nous pouvons mesurer l’absorbance A (ou DO) d’une solution. C’est-à-dire sa capacité à absorber la lumière d’une certaine longueur d’onde, et cette absorbance est directement liée à la concentration selon la loi de Beer-Lambert : A = Ɛ x l x C avec Ɛ = coefficient d’absorption molaire (L.mol-1.cm-1) l = épaisseur de la cuve (cm) C = concentration de l’espèce chimique dosée

travaillerons ici en absorbance, lue sur l’écran d’un multimètre digital. ➢ Sur le spectrophotomètre, fais le « blanc » (absorbance A = 0) à partir d’eau distillée. ➢ Détermine l’absorbance de chaque solution étalon pour une longueur d’onde d’étude de 520 nm et consigne tes résultats dans le tableau suivant. |Concentration en I2 |2,0 × 10-3 mol.L-1 |4,0 × 10-3 mol.L-1 |6,0 × 10-3 mol.L-1 |8,0 × 10-3 mol.L-1 | |Absorbance A