B Galactosidase

: Mélange A ( essai ) : 150 L de cellules compétentes + 6 µL de mélange 1 (cf page 6) Mélange B (témoin) : 150 L de cellules compétentes + 2 l de plasmide circulaire fourni par l’enseignant Mélange C (témoin) : 150 L de cellules compétentes · Incuber 30 min dans la glace· Incuber 2 min à 42 °C· Incuber

B-L’hybridation permet le repérage d’une séquence d’ADN Digestion par enzyme de restriction ADN génomique extrait Fragments d’ADN Électrophorèse Séparation par taille Hybridation avec sonde sb marquée Choix température * Transfert sur membrane Par capillarité Dénaturation par NaOH Fixation Lavage autoradiographie b-les autres types d’hybridation Hybridation de colonies bactériennes Puces à ADN L’ARN peut aussi être hybridé : northern blot L’hybridation sur puce pour

plasmide dans la bactérie hôte par traversée de la membrane plasmique) se fait par choc thermique. Il existe aussi des transformations par choc électrique. Le plasmide pBluescript contient dans sa séquence un gène LacZ codant pour une enzyme, la β-Galactosidase. Cette enzyme rend un produit bleu en présence de X-Gal (présent dans le milieu de culture). C’est sur ce gène que se situent les sites de coupure des enzymes de restriction. Nous observerons tout d’abord les résultats de la digestion de l’ADN

Cours d'enzymologie fondamentale 1 I. Introduction à l'étude de l'enzymologie. A. Vocabulaire. Substrat : structure qui sera susceptible d'être transformée lors d'une réaction chimique (A donne B) catalysée par un enzyme pour donner un produit B. Le substrat pourra aussi être un produit. Produit : il est issu de la transformation par une enzyme. Le produit peut être un substrat pour une autre enzyme. Inhibiteur : composé reconnu par l'enzyme mais ne conduisant pas à une réaction. Effecteur

3. Réactions enzymatiques : restriction et ligation 4. Electrophorèse en gel d’agarose a) Migration/Séparation b) Conditions opératoires c) Visualisation d) Purification III. Résultats et discussion 1. Gel 1 2. Gel 2 B. Transformation bactérienne I. principes 1. la chimiocompétence 2. l’électroperméabilisation II. Résultats et discussion

distingue six fragments entourés d'un smear (il s'agit d'une sorte d'étalement d'ADN de tailles différentes). Le fragment le plus supérieur se trouve à environ 12 000 paires de bases, le plus « en bas » semble constitué d'environ 4 000 paires de bases. B. Ligation et transformation bactérienne. La ligase est une enzyme à l'origine de la ligation. Celle-ci a pour but de rétablir les liaisons entre le plasmide précédemment linéarisé et l'un des fragments d'ADN précédemment segmenté. La transformation

| 37.95 | 36.95 | La concentration en lactose pour les deux laits ne se trouve pas dans les normes. Ceci pourrait être expliqué par une contamination par des microorganismes du lait. En effet les microorganismes ont une enzyme, la β galactosidase, qui leur permet de dégrader le lactose et former de l’acide lactique qui acidifie le lait. A force de manipuler nos deux flacons de lait, les laits ont été en contact avec des bactéries. 6- la caséine : Pour les deux laits la caséine est

MONOSACCHARIDES Tous les carbones sauf un portent une fonction alcool (CHOH). Ex : Le triose, le tétrose, le pentose, l’hexose. A. Les pentoses Ils possèdent une structure cyclique. Ex : Le ribose et le désoxyribose   B. Les hexoses 1/ Structure Ils possèdent 6 carbones. Les plus connus sont le glucose, le fructose, et le galactose. Formule brute : C6H12O6  2/ Métabolisme du glucose Oxydation (« Cycle de Krebs ») :  C6H12O6 + 6 O2

moléculaire en fonction de la distance de migration en utilisant comme référence deux standards qui contiennent des complexes SDS-polypeptide, puis les poids moléculaire d’inconnus ont été déterminés. Il a été trouvé que la protéine phosphorylase B est celle avec la migration la plus précise, puisque en comparant les poids moléculaires (PM) théorique et expérimental, le % d’erreur obtenu est de 0.75%, en revers l’albumine est la protéine avec la migration la moins précise puisque le % d’erreur

l'ADN et l'ARN et enfin nous résumerons comment l'information génétique est transportée du noyau au cytoplasme. Activité 1: Grâce au logicielle ANAGENE, nous avons comparé des allèles sanguins de groupes différents (A et B). On remarque qu'une substitution s’opère dans le brin B par rapport au brin A : -Niveau 523: Le nucléotide Guanine remplace le nucléotide à Cytosine -Niveau 700: Le nucléotide Adénine remplace le nucléotide à Guanine -Niveau 793: Le nucléotide Adénine remplace le nucléotide à