Inhibiteur enzymatique

pour la détermination de Km et Vmax Il y a deux régions d’utilité analytique dans la courbe cinétique de - [S] < 0.1Km (pour la quantification du substrat) Vo-[S]: - [S] > 10Km (pour la quantification d’enzyme) Dans le développement d’un essais enzymatique, il est important de connaître la valeur de Km de l’enzyme et d’ajuster la valeur de Vmax afin que l’essais est accompli dans le minimum de temps requis pour une précision donnée. Il y a quatre méthodes graphiques pour établir les valeurs de Km

Enzymologie : Calculs Formules Vi = k2 [Et] (en phase stationnaire) Vm [S] V = ----------Km + [S] Présence d’un inhibiteur compétitif : K’m = Km (1+ [I]/Ki) Présence d’un inhibiteur non compétitif : V’m = Vm /(1+[I]/Ki) UI = µmol substrat/min Katal = mol substrat/sec AMS = mol substrat / (mol d’enz x sec) = k2 AS = AE / prot (mg) Facteur de purification = ASf/ASi → attention aux unités !!! → attention aux dilutions !!! AEf = AEi x Vi/Vf (Vi/Vf = facteur de dilution ex : dilution 1/50)

Le tutorat est gratuit. Toutes reproductions ou vente sont interdites. Enzymologie : Calculs Résolution de QCM
Activité enzymatique • On constate après incubation de 30 minutes, en présence de 0,5 ml d’un sérum dilué 100 fois, une hydrolyse de 150 nmol de paranitrophénylphosphate, substrat de la phosphatase alcaline. L’activité phosphatase alcaline du sérum, exprimée en UI/L de sérum sera : 150 . 10-3 μmol x 100 (dilution !) AE = ------------------------------------------------ = 1000

Exercice 1 Exercice enzymologie Pour l’étude d’une poudre A possédant une activité enzymatique, on en dissout 0,1 g dans une solution tampon convenable et on complète à 10 ml, on obtient ainsi la solution B. Les mesures d’activités enzymatiques sont effectuées après dilution de 1 ml de solution B dans 9 ml de solution de substrat (S). La concentration en substrat dans le milieu réactionnel est de 10 Km (Km = 1 mmol.L-1) [P] (µmol.L-1) 10 5ème année de Pharmacie 2010-2011 K. CHIKH 8 6 4 2 0 2

Exercices - Cinétique enzymatique 1. Que devient la valeur de v /Vmax quand [S ] = 4 K m ? 2. Si Vmax = 100 μmol / ml / s et Km = 2mM, quelle est la vitesse de la réaction quand [S]=20 mM ? 3. Dans une réaction à cinétique de type Michaelis-Menten, k1 = 7 X 10 7 M −1 s −1 , k −1 = 1 X 103 s −1 , et k 2 = 2 X 10 4 s −1. Quelles sont les valeurs de Ks et de Km? La fixation du substrat atteint-elle l’équilibre ou plutôt l’état stationnaire? 4. Les résultats suivants sont obtenus au cours d’une

initiales, la vitesse d’une réaction enzymatique est constante est s’appelle la vitesse initiale. b. Partie AB La courbe s’incurve. Dans cette partie, la vitesse de réaction diminue. c. Partie BC La courbe est parallèle à l’axe des abscisses. La concentration en produit n’évolue plus en fonction du temps : la vitesse de réaction est nulle. 1.2.3. Détermination de la vitesse initiale De manière générale, la détermination des vitesses d’une réaction enzymatique se fait dans les conditions initiales

Des enzymes à la fonction enzymatique retour accueil, nouveau cours 1èreS, plan du cours 1èreS Les hypothèses concernant le fonctionnement enzymatique seront présentées ici comme des données puisque le temps et le programme ne nous permet pas d'en faire l'étude expérimentale. Le propos de départ ici est d'étudier des produits de l'expression de l'information génétique (à replacer dans la page générale). Il ne faut pas considérer ce chapitre comme un cours de biologie sur les enzymes

Etude expérimentale de la phosphatase alcaline I. BUT : Etude cinétique de l’activité enzymatique d’une enzyme la phosphatase alcaline .On procède à :  Une étude cinétique de la libération des produits de la réaction.  Etude de l’influence de la concentration de substrat(PNPP) sur la vitesse de la réaction.  Etude d’un phénomène de compétition entre deux substrats. II. PRINCIPE :  L’ étude cinétique de la libération des produits de la réaction

Dans certain cas, les réactions peuvent être tellement lentes que l’on doit avoir recours à un catalyseur pour les accélérer et ainsi, pouvoir les mesurer. On donne le nom de « réaction enzymatique » à ces réactions, dont le processus est accéléré par une enzyme. Or, cette expérience enzymologique étudie l’effet que peut avoir la concentration d’enzyme sur la vitesse de la réaction. De plus, on tente d’élucider l’effet du pH sur la réaction ainsi que l’effet de la concentration du substrat. Pour

Cinétique enzymatique Mesure de l’activité enzymatiqaue Dr AKSAS 1 Cinétique enzymatique La R enzymatique peut être subdivisée en 3 étapes: 1. Phase préstationnaire; 2. Phase stationnaire; 3. Phase post-stationnaire. 2 Cinétique Michaelienne Représentons les vitesses initiales de R en fonction des concentrations du substrats 3 Cinétique Michaelienne  Les vitesses mesurées croissent en fonction des concentrations du substrat.  Mais cette relation n’est pas linéaire :