Inhibiteur enzymatique

l’influence de la concentration en substrat et de la présence d’un inhibiteur sur la vitesse de réaction. Dans ce TP, nous allons utiliser une préparation commerciale de phosphatase alcaline de veau. Il s’agit d’une enzyme alcaline à 2 substrats, capable d’hydrolyser les monoesters phosphoriques selon la réaction suivante : R-O-PO3 2- + H2O R-OH + HPO4 2- II. Principe Afin de suivre la réaction enzymatique, nous allons réaliser un dosage spectrophotométrique des produits

biochimiques. Partie enzymologie Définir les termes d'enzymologie : enzyme, substrat, produit, coenzyme, activateur, inhibiteur, réaction enzymatique, propriétés et classification des enzymes (nomenclature). Rappeler la cinétique chimique, en terme de notion d'ordre d'une réaction, réactions élémentaires et complexes formées. Etudier la vitesse d'une réaction enzymatique en fonction du temps, de la concentration d'enzyme, de la concentration du substrat, en représentation graphique normale

Introduction 1 Matériel et Méthodes 5 Résulats 9 Observations microscopiques des fractions 9 Fractionnement cellulaire, matériel biologique et dosage protéique des fractions 10 Cinétique enzymatique 11 Gel d’électrophorèse 14 Discussion 16 CONCLUSION 20 Références 21 Annexe 1 : CINÉTIQUE ENZYMATIQUE : EXEMPLE DE CALCUL POUR L’EXTRAPOLATION POUR LES DONNÉES DE vmax, km et ki AVEC LE GRAPHIQUE 2 (P.12) 18 Table des tableaux et des figures Tableau I : Dosage des échantillons de fractions

réactions doivent se passer dans des conditions douces, c'est-à-dire à la température de l'organisme qui correspond à une isothermie tempérée, dans une étroite frange de pH et en milieu de force ionique généralement faible. II°) La réaction enzymatique: Ces réactions ne peuvent se produire qu'en présence de catalyseurs biologiques, les enzymes. Un catalyseur est une substance qui accélère la vitesse d'une réaction chimique mais qui n'est ni consommée ni transformée par la réaction. Pour réaliser

ACTIVITÉ ENZYMATIQUE DE LA CATALASE¸ Par Clarence Beaulieu Nicholas Plante Jérémie Rompré Travail remis à Justin Rousseau Enseignant Dans le cadre du cours NYA-101-05 Évolution et Diversité du vivant Groupe 06 Cégep de Saint-Hyacinthe 29 septembre 2015 Tableau des résulats : Variation de pression des différents types de solution durant 100 secondes Variations Pression initiale (kPa) Pression finale (kPa) Activité enzymatique (kPa/min) Témoin 96,2 125

: les glycérophospholipides et les sphingolipides Stérols et stéroïdes Double couche lipidique et membranes biologiques 81 82 82 84 86 88 PARTIE II CATALYSE BIOLOGIQUE : STRUCTURE ET MÉCANISME D’ACTION DES ENZYMES CHAPITRE 5 • Cinétique enzymatique Relations entre la vitesse de réaction et la concentration du substrat ou de l’enzyme Théorie du complexe stéréospécifique et propriétés cinétiques des enzymes Équation de Michaelis-Menten Détermination expérimentale des valeurs de Vmax et de KM

été faite par SDS-PAGE et la concentration en AAL après chaque étape a été déterminée par cinétique enzymatique suivie par spectrophotométrie. On en tire un bilan de purification et une future stratégie expérimentale pour d’éventuelles analyses des propriétés biochimiques de l’AAL. Introduction Le L-aspartate est produit à partir de fumarate et d’ammoniac à l’aide de l’activité enzymatique de l’AAL. L-aspartate fumarate

une réaction enzymatique : pour transporter un substrat ; pour accepter un produit ; comme participant à la structure de l’enzyme. Ions (exemple : atome de zinc de l’anhydrase carbonique) ou petites molécules minérales (exemple : H2O, milieux biologiques) Certains cofacteurs = molécules + complexes synthétisés par la cellule = coenzymes Coenzyme : molécule biologique (synthèse uniquement dans les cellules vivantes) intervenant comme cofacteur indispensable dans la catalyse enzymatique d’une réaction

TP : ETUDE EXPERIMENTALE DE LA PHOSPHATASE ALCALINE BUT Nous allons déterminer les paramètres cinétiques d’une enzyme en étudiant l’influence de la concentration en substrat et celle de la présence d’un inhibiteur dans le milieu réactionnel. On va mesurer l’activité de l’enzyme en mesurant par spectrophotométrie l’apparition du produit de la réaction qui sera coloré. PRINCIPE Nous allons utiliser dans ce TP la phosphatase alcaline de veau. C’est une enzyme à 2 substrats qui à un pH optimal

membranaires : les glycérophospholipides et les sphingolipides 84 Stérols et stéroïdes 86 Double couche lipidique et membranes biologiques 88 PARTIE II CATALYSE BIOLOGIQUE : STRUCTURE ET MÉCANISME D’ACTION DES ENZYMES CHAPITRE 5 • Cinétique enzymatique 93 Relations entre la vitesse de réaction et la concentration du substrat ou de l’enzyme 94 Théorie du complexe stéréospécifique et propriétés cinétiques des enzymes 94 Équation de Michaelis-Menten 96 Détermination expérimentale des valeurs