Plasmide

notre objectif est de sous-cloner un ADNc obtenu par RT-PCR à partir d’un ARNm de la Tyrosine Amino Transférase (TAT) de Rat, enzyme impliquée dans la gluconéogenèse, dans le vecteur d’expression pGEM-T. Pour cela, l’ADNc sera introduit dans un plasmide et pourrait ainsi être transcrit in vitro en ARN, afin d’être utilisé comme sonde pour étudier l’expression du gène TAT. Figure 1 : Schéma de la stratégie générale du TP Dans ce TP, nous n’allons effectuer les étapes qu’à partir de la PCR, les étapes

premiers et la souche B les trois derniers. Des mélange A + B de bactéries sans plasmides ne permettent jamais le développement de colonies sur milieu minimum. 2. Pourquoi peut-on dire qu’un transfert horizontal de gènes a eu lieu ? Chez la plupart des bactéries, l’information génétique est présente de deux formes : - Un chromosome unique circulaire d’ADN - Une molécule circulaire d’ADN plus petite appelée plasmide qui n’est pas indispensable au métabolisme bactérien. Capable de s’auto-répliquer

simplement le fonctionnement et l’intérêt théorique des plantes génétiquement modifiées dites « Bt ». Q3 : A l’aide de schémas titrés et légendés, montrez 1) la constitution d’un plasmide pTi tel qu’on le trouve dans une agrobactérie native et 2) la constitution d’un vecteur de transformation co-intégré dérivé de ce plasmide natif pouvant être utile pour la transgénèse

manipulation bactérielle. [pic] Le gène INS, codant pour l'insuline est prélevé dans le noyau d'une cellule humaine. (Le gène INS est situé sur le chromosome humain n°11) Ce gène est recombiné avec un marqueur de bactérie Escherichia coli et un plasmide recombinant pour compléter le chromosome. Ce chromosome est alors introduit dans le génome d'une bactérie de l'espèce Escherichia Coli, cultivée en laboratoire. Les bactéries sur lesquelles l'introduction a été fructueuse sont ensuite sélectionnées

acides aminés 1-25, 75-100, 185-210. Les résultats obtenus avec les protéines chimères indiquent que chacun des ces segments est un segment transmembranaire et définissent leur organisation dans la membrane. Les chimères entre les segments 1 et 2 (plasmides 1 et 2) ont une activité phosphatase alcaline élevée, indiquant que la phosphatase alcaline est dans l’espace périplasmique. Ces résultats montrent que le segment 1 sert de peptide de début de transfert, son extrémité N-terminale faisant face au

L’intégration de l’ADN génomique dans l’ADN du plasmide se fait de la façon suivante : on fait agir des enzymes de restriction sur le mélange des deux ADN. Ce traitement va permettre l’ouverture des deux ADN et la formation d’extrémités collantes complémentaires. Les rencontres des fragments d’ADN plasmidique et génomique se feront au hasard aboutissant à la formation de nouveaux plasmides un peu plus grands et portant des fragments d’ADN génomique. Ces plasmides recombinants sont ensuite réintroduits dans

complet de PDS qui inclut le codon ATG1 a été copié dans le vecteur TOPO4 (Invitrogen, Carlsbad, CA) et le plasmide a été appelé pHy4ATG5 (Michel et autres, 2004). Ce plasmide a été employé comme un calibre pour substituer Arg304 de PDS avec de tous les acides aminés normaux using un kit Emplacement-dirigé QuickChange de mutagénèse (Stratagene, CA, Etats-Unis ; no.2000518), et les plasmides ont été appelés la série ATG1. Les amorces employées pour remplacer Arg304 par Cys, Ser et le sien ont été

dans son plasmide (pKY70GIN) contient le gène d’interêt (GUS-intron), une souche receveuse d’A. tumefaciens et une troisième souche « helper » d’E. coli. Celle-ci contient les éléments nécessaires à la conjugaison entre la souche receveuse et donneuse. La quatrième souche de bacteries qui posséde déjà le plasmide pKY70GIN est utilisée comme un témoin positif. Après incubation des trois souches bacteriennes nous effectuons une double séléction positive d’agrobacteries contenant le plasmide pKY70GIN

juste relative à l'ADN (DNA) des plasmides (choisir une seule réponse)   a) Le DNA d'un plasmide a une structure différente de celle du DNA chromosomique par l'existence de bases distinctes - الحمض  النووي الريبوزي ناقص الأكسيجين للبلاسميد يختلف عن نظيره بالكروموزوم يوجود قواعد مختلفة  b) L'ADNd'un plasmide est circulaire -  c) L'ADN d'un plasmide est dénaturé par la chaleur d'autant plus difficilement qu'il est riche en appariement A-T -   d) L'ADN d'un plasmide est un DNA viral intégré dans le

biotechnologies médicales. Le gène codant pour l’insuline a été isolé à partir de cellules de pancréas. Ce gène a été inséré dans un morceau d’ADN (plasmide) pouvant être traduit par des bactéries. Le plasmide a été injecté dans les bactéries. Les bactéries ont été placées dans un milieu nutritif (culture) pour la multiplication des bactéries. Le gène inséré dans le plasmide a été répliqué par les bactéries à chaque division. Chaque bactérie produit l’insuline de la même manière qu’elle synthétise ses propres