Plasmide

DNA into a plasmid (separate circular DNA-molecule) and use the plasmid as a vector (transportation device) to bring the foreign DNA into a creature. One has to test afterwards if the two procedures (transformation and fusing) have worked, because they do not always work as expected. Genetical production of Insulin Insulin consists of the proteins A and B. They are connected via disulfide bridges. • Construction of the genes A and B • Each of these genes comes into a plasmid which is inserted

vecteur plasmidique BamHI HindIII KpnI SmaI EcoRI PvuII BamHI EcoRI SMC Digestion BamHI et EcoRI BamHI EcoRI + ampR ori ligase 2 Insertion du gène d'intérêt dans le vecteur BamHI EcoRI plasmide recombinant 3 Transformation des bactéries par le plasmide recombinant clone bactérien sélection sur un milieu contenant de l'ampicilline IGM Clonage d'un fragment d'ADN Sélection d’un vecteur recombinant par le test de complémentation IGM La PCR Conçue

et chimiques. Température, chaleur (100°C), UV, Rayons X, agents chimiques Stérilisation : Chaleur humide à 120°C Cours IFSI 2010 S1 Pr G. Arlet LES CONSTITUANTS INTERNES Cytoplasme Acide désoxyribonucléique : Chromosome, ADN surenroulé Plasmide Réplication sur les deux brins (< 20 min.) Acides ribonucléiques : messager, de transfert, Ribosomal Small ARN Cours IFSI 2010 S1 Pr G. Arlet Morphologie quelques exemples Coques Gram + en amas Bacilles gram – mobiles péritriches Bacilles

divers procédés physiques et chimiques, ce qui permet d'étudier les constituants bactériens ainsi libérés. Elles sont constituées par des éléments essentiels : chromosome, membrane nucléaire, cytoplasme, paroi … ; et d’autres facultatifs tels que : plasmides, capsule, pilli … I- Cytoplasme : Le cytoplasme bactérien est sous la forme d’une gelée (hyaloplasme) dépourvu de presque la totalité des organites des eucaryotes à l’exception des ribosomes (le siège de la synthèse protéique) constitués chacun

sur la différenciation. 2009 Cellules iPS vierges de virus: transfert de gènes à l’aide de plasmides Nouvelle méthode au lieu d’utiliser un virus on introduit un plasmide avec une protection contre bactérie au départ on fait ca en présence d’antibiotique on maintient une pression de sélection sur cellule pour garder la plasmide Lors on enlevé le traitement on aura de s cellules reprogrammé sans plasmide, on s’affranchit d’avoir des gènes étranger dans la cellules finale. Caractéristiques

autre enzyme spécifique appelée ADN ligase. Celle-ci a pour rôle de "coller" les bouts d'ADN les uns au autres pour ainsi reconstituer un plasmide circulaire. Cette étape, appelé ligation, peut durer de quelques minutes à quelques heures.  Enfin, on place ce plasmide dans une bactérie pour que celle-ci le copie à chaque division. Ainsi, le nombre de plasmide est multiplié par deux à chaque division cellulaire. Pour la bactérie la plus souvent utilisé,  Escherichia coli (une bactérie intestinale)

utilisées : Nature des sondes Avantages Inconvénients L’ADNc double brin : -ADN déjà cloné dans un plasmide -Amplifié par PCR -stable, obtention possible en grande quantité  -dénaturation avant utilisation -séquence longue (TM élevée) ADNc simple brin -Obtention par PCR asymétrique (présence d’une faible quantité d’amorces) -Stable -Ne nécessite pas de dénaturation ARN messager -ARN cloné dans un plasmide contenant deux promoteurs viraux -grande quantité -sondes très marquées -stable -hybridation

(Maître assistant à l’INAT) VECTEUR Un plasmide = ADN bicaténaire circulaire d’origine bactérienne Mastère INAT 2009-2010 Module Génie Génétique et Biotechnologie Végétales Walid Hamada (Maître assistant à l’INAT) VECTEUR Un plasmide binaire = ADN bicaténaire circulaire provenant d’ Agrobacterium tumefaciens Mastère INAT 2009-2010 Module Génie Génétique et Biotechnologie Végétales Walid Hamada (Maître assistant à l’INAT) Le plasmide binaire Mastère INAT 2009-2010 Module Génie

vasculaire endothélial) favorise la progression de l'artériosclérose chez les animaux de laboratoire. Différents facteurs de croissance angiogènes en sont actuellement au stade des essais cliniques (voir tableau). La thérapie génique avec le plasmide NV1FGF, au cours de laquelle l'ADN est injecté directement dans la musculature de la jambe ischémiée, en est au stade de développement le plus avancé. Les données précliniques documentent le haut degré de sécurité de cette construction génique. Une

développement C – les structures internes • b) les plasmides (chez certaines espèces) • Ce sont des morceaux d’ADN, beaucoup plus petits que le chromosome (au moins 100 fois) porteurs d’un ou plusieurs gènes codant pour des protéines supplémentaires, • Non indispensables à la survie de la bactérie, mais apportant de "nouvelles capacités« (résistance aux antibiotiques, production toxine) • certaines bactéries sont capables de s’échanger les plasmides. C – les structures internes • c) le cytoplasme