Plasmide

-Transformation d’une bactérie compétente . - Transcription in vitro en utilisant des dNTP marquées par la Digoxygénine (DIG). • Montage des lames avec la solution d’ hybridation et incubation à 50°C pendant une nuit. • Lavages post-hybridation. plasmide Les coupes montées avec la solution d’hybridation. Hybridation in situ Révélation par deux techniques : Immuno-détection via des anticorps antiDIG couplés à la phosphatase alcaline. Immuno-détection via des anticorps antiDIG couplés

carte de restriction. L’analyse est appelée polymorphisme de longueur de fragment de restriction (RFLP : Restriction Fragment length Polymorphism). Exposé de génétique moléculaire Page 5 Clonage d’un gène Les plasmides bactériens De nombreuses bactéries contiennent un ou plusieurs plasmides. La plupart sont des molécules d’ADN circulaire double brin, beaucoup plus petites qu’un chromosome de 3 a 10 Kb (milliers de paire de base) Ce sont des unités de réplication autonome vis-à-vis du chromosome bactérien

La conjugaison : les bactéries établissent des ponts ( pili) entre elles par lesquels elles échangent des molécules, dt l’ADN.( cela peut être un plasmide, petite molécule d’ADN circulaire indépendante du chromosome bactérien : on parle alors d’hérédité cytoplasmique pour qualifier la transmission de caractères via le plasmide)  Il existe des nbrx indices montrant ces transferts. ll faut comparer les séquences de protéines et rechercher les séquences apparentées. On peut ainsi

Sélection des clones possédant le plasmide recombinant surproduisant l’AAL Après l’étape d’amplification par PCR, la souche a été isolée sur milieu gélosé additionné de Tétracycline et d’Ampicilline. De ce milieu, les cellules d’E.coli ayant intégré le plasmide recombinant ont été sélectionnées par vérification de la présence de ce plasmide à l’aide d’une électrophorèse sur gel d’agarose (Cf. Image 1). Les pistes des colonies n° 1, 2 et 4 montrent la présence du plasmide par un spot de migration. Elles

Borrelia burgdorferi (responsable de la maladie de Lyme), le chromosome est linéaire. Il existe également quelques bactéries qui possèdent deux chromosomes. L'ADN des bactéries existe aussi sous forme de plasmides. Ce sont des éléments génétiques non chromosomiques. La distinction entre plasmides et chromosomes est vague, bien que leur taille et leur importance soient généralement prises en compte. Les chromosomes bactériens initient la réplication et permettent ainsi la fabrication de médicaments

sont détruits par les phagocytes. La capsule peut être produite in vivo ou in vitro. La synthèse de celle-ci est gouvernée par un plasmide de 60 méga-daltons se nommant plasmide pXO2 et les enzymes de synthèse sont codées par les gènes cap (capB, capC, capA) et dep (6). La toxine protéique est quant à elle codée par un plasmide de 110 méga-daltons se nommant plasmide pXO1 et est formé de trois protéines : le facteur I oedématogène ou EF (Edema Factor) codé par le gène lef, le facteur II antigène

dans un ADN plasmidique (circulaire). On prend le gène et on l’insère dans le plasmide, on le met ensuite dans la bactérie qui va le multiplier. Comme les bactéries se multiplient vite, elles multiplient vite le plasmide. On purifie le plasmide qui contient le gène qu’on veut et on insère le plasmide dans la cellule qui l’accueille dans son noyau et on peut produire une protéine à partir du gène présent dans le plasmide. Cette technique est beaucoup utilisée pour faire produire à une cellule une

PLP séparées sur un gel Glycopeptides biosynthèse Résistance D-lac Inhibition de la réaction de transpeptidation Résistance Comparaison US/Old Europe PROTECTION DE LA CIBLE ? Protéines Qnr Identification de Qnr (QnrA1) sur le plasmide pMG252 dans 1 souche clinique de K. pneumoniae multi-R dont une CASE plasmidique aux USA (Martinez-Martinez et al., Lancet 1998) 1998 Protéine de 218 AA (gène 657 pb) de la famille des protéines à motifs pentapeptidiques répétés : [Ser/Thr/Ala/Val]

toujours construite de muréine (une protéine) Pas de paroi cellulaire de muréine (parfois paroi sans muréine) Pas de noyau cellulaire Il y a toujours au moins 1 noyau cellulaire Cellules <5μm Cellules >10μm DNA circulaire sans protéines et plasmides DNA linéal avec protéines Petits ribosomes Grands ribosomes Reproduction asexuel Reproduction sexuel ou asexuel (thème 4) Pas d’organites cellulaires Plusieurs organites cellulaires PROCARYOTE EUCARYOTE PROCESUS DE DIFFÉRENCIATION CELLULAIRE

IPCC-Image Confrontation entre modèles et données réelles pour la structure spatiale des molécules d’ADN par le biais de la réalité augmentée II-3- Images traitées Dans la suite nous allons travailler, essentiellement, sur deux images AFM de plasmide d'Escherichia Coli PBR322. Préparation de l'échantillon Toute cette partie, de la préparation de l'échantillon à son observation en AFM, a été réalisé par l'équipe du Laboratoire Multicouches Nanométriques [9] de l'université d'Evry-Vald'Essonne