Plasmide

b- Selon la manière d’assembler ces séquences, obtiendra-t-on la même protéine après traduction ? Expliquer en faisant un schéma de la protéine de fusion obtenue dans chaque cas. 4- Une fois l’ADN recombinant obtenu, il doit être inséré dans un plasmide (on dit aussi « vecteur ») d’expression permettant sa transcription et sa traduction dans les cellules de souris. Au préalable, pour disposer de suffisamment de vecteur pour réaliser l’expérience dans les cellules de souris, il est nécessaire

de scinder l ' ADN ) pour étudier le clonage moléculaire grâce à l'outil informatique , c'est le clonage « In Sillico ». Table des matièresTable des matières 1) Les enzymes de restriction :1 a) Le plasmide1 b) Les Enzymes2 2) Digestion du plasmide à l'aide des 2 enzymes de restriction2 3) Digestion du phage Lambda3 4) Insertion d'un fragment de phage dans le vecteur4 1) Les enzymes de restriction :a) Le plasmideOn retrouve les sites de restriction pour les 2 enzymes : Site de restriction

Rôles et propriétés IV-2- Les flagelles a) Mise en évidence b) Morphologie et mode d’insertion c) Architecture moléculaire d) Synthèse du flagelle e) Fonctionnement du flagelle f) Rôle des flagelles IV-3- Les pili ou fimbriae IV-4- Les plasmides IV-5- Les spores a) Mise en évidence b) Morphologie et structure c) Composition chimique d) Le cycle sporal e) Les étapes de la sporulation f) Propriétés de la spore Chapitre 2 : Morphologie et ultrastructure des bactéries I- Morphologie

détecter l’ensemble. La Tm dépend de la zone d’hybridation. Pour ADN homologues : Tm = 2 (nb (A +T)) + 4 (nb (G + C)) On estime qu’1 % de bases non appariées diminue le Tm de 1,5 °C. Hybridation sur colonie. Chaque colonie bactérienne a un plasmide différent. On procède à une hybridation à la sonde radioactive, puis à une autoradiographie qui donne la localisation. * Hybridation in situ par fluorescence, directement sur le chromosome. * Puces à ADN (1 puce : 0,2 *0,2 mm). Chaque spot

TGGATGGGCGATGGCTTCTTGTTGTGAGGCGGG 3.1.Dessiner la molécule d'ADN cellulaire en orientant les brins. Nommer chaque brin. 3.2. Ecrire le produit de transcription correspondant et le nommer. Orienter la molécule obtenue. Exercice 3 : Plasmides, enzymes et cartes de restriction. 1. Donner la définition d'un plasmide. Quelles sont ses caractéristiques ? Pourquoi sont-il couramment utilisés par les chercheurs en biologique moléculaire ? 2. A quelle longueur d'onde mesure-t-on l'absorbance d'une solution d'acide nucléique ?

CAT AAAAA CAT Promoteur 14C Chloramphénicol Ac-CoA + 14C Chloramphénicol A partir de cellules en culture, on fait rentrer par transfection l’ADN à l’intérieur des cellules et on dose la quantité d’ADN : on fait rentrer un plasmide. Plus l’activité CAT est élevée, plus le promoteur est actif. Si transfection dans cellules de muscle, il y a un promoteur de myosine qui entraîne une augmentation de l’activité CAT. On fait donc une étude en fonction du type cellulaire ou du

effectuées avant le TP. Penser à allumer un bain sec à 42°C et un bain marie à 37°C! III) Ligation - préparer 2 tubes pour les ligations : 1 pour le plasmide digéré seul et 1 pour le mélange plasmide pBS-SK et la séquence contenant une partie du rétro-transposon (plasmide + insert). - préparer les mélanges réactionnels : Tampon de ligation 10X Ligase (1 U) Plasmide digéré Fragment ADN retro-transposon H2O stérile ____ 1 4 4 10 µl µl µl µl µl Si nécessaire : qsp - La ligation sera effectuée à température

2.4 2.2.5 Génétique bactérienne Variations génétiques par mutation Caractères de la mutation bactérienne La mutation à l’échelon moléculaire Les variations génétiques par transfert de matériel génétique La transformation La conjugaison Les plasmides La transposition - Les transposons La transduction Chapitre 3 : 3.1 3.2 3.3 3.4 3.4.1 3.4.2 3.5 3.5.1 3.5.2 3.5.3 3.5.4 3.6 3.7 Staphylocoques Définition Historique Habitat Pouvoir pathogène Caractères généraux Infections staphylococciques

glyphosate. Malheureusement, au niveau moléculaire, la tolérance au glyphosate reste peu comprise, donc regardons comment on fait pour envoyer cet enzyme dans le génôme. On crée d’abord un plasmide vecteur comportant l’enzyme voulu, (pas de définition de plasmide car déjà utilisé) Définition : Un plasmide désigne en microbiologie ou en biologie moléculaire une molécule d'ADN surnuméraire distincte de l'ADN chromosomique, capable de réplication autonome et non essentielle à la survie de la cellule

reproductif (repro non naturelle)Chapitre 4 : La complexification des génomes :• Différents transferts horizontaux :• Impact transfert bactérien pour santé humaine : au sein des populations bactériennes, les transferts horizontaux par le biais de plasmides (conjugaison) constituent le principal mécanisme de la propagation rapide des gènes de virulence et de gènes de résistance aux antibiotiques. Ces transferts sont favorisés par l’abondance des bactéries dans notre environnement le plus proche, notamment