Réaction en chaîne

LA TECHNIQUE D’AMPLIFICATION IN VITRO PCR La PCR ou Polymerase Chain Reaction (la réaction en chaîne par polymérase) est une technique qui permet d’amplifier l’ADN ou l’ARN in vitro. Elle a été développée par Kary Bank Mullis (prix Nobel de chimie en 1993). La PCR se base sur le principe suivant : • • • Connaître d’abord les fragments (20 nucléotides) qui encadrent la séquence d’ADN à amplifier. Synthèse de séquences complémentaires à ces fragments : ce sont les amorces oligonucléotidiques. L’ADN

PCR (POLYMERASE CHAIN REACTION) Amplification des acides nucléiques PCR RT-PCR PCR en temps réel Et leurs applications La PCR : une révolution technologique en biologie moléculaire APPLICATIONS : - Médecine légale * Identification d’un suspect * Recherche de paternité - Détection de microorganismes pathogènes (à ADN ou à ARN) - Diagnostics préimplantatoire et prénatal - Etude de l’expression des gènes - Détection de mutations - Agroalimentaire (OGM) Etude d’un cycle de PCR 1

cette réaction est une DNA polymérase. On l’a appelé CHAIN, car le produit d’une première réaction devient substrat de la deuxième réaction, et ainsi de suite. C’est une technique très puissante et simple qui est rapidement devenue l’une des techniques les plus utilisées en biologie moléculaire. Cette technique amplifie un fragment spécifique d’ADN à partir d’infime quantité d’ADN source, même si l’ADN source est d’une qualité relativement mauvaise. 2.Les composantes d’une réaction PCR ADN

La PCR quantitative La PCR quantitative La PCR quantitative (ou PCR en temps réel) est une méthode particulière de réaction en chaîne par polymérase permettant de mesurer la quantité initiale d'ADN. En réalité, la PCR quantitative mesure le nombre d'amplicon (portion d'ADN définie par un couple d'amorces).
Il existe diverses techniques permettant de quantifier l'ADN en biologie moléculaire. On peut utiliser la spectromètrie à 260 nm. Une autre technique fiable permettant la quantification de l'expression

pouvoir mener une analyse spécifique de détection d’OGM en utilisant la réaction de polymérisation en chaîne (PCR). La qualité et la pureté des acides nucléiques comptent parmi les facteurs les plus critiques pour l’analyse PCR. Afin d’obtenir des acides nucléiques hautement purifiés exempts de tout contaminant visibles, des méthodes d’extraction adéquates devraient être appliquées. Les contaminants susceptibles d’inhiber la réaction PCR sont énumérés dans le Tableau 1. Afin d’éviter un résultat « faux-négatif

une sorte de code barre. Chaque personne possédant des chromosomes uniques le code barre ou empreinte génétique diffère d’un individu à l’autre. Les différentes techniques : La Méthode PCR (Réaction par polymérase) : La «Polymérase Chain Réaction» ou PCR (ou encore ACP pour Amplification en Chaîne par Polymérase), est une technique de réplication ciblée in vitro. Elle permet d'obtenir, à partir d'un échantillon complexe et peu abondant, d'importantes quantités d'un fragment d'ADN

6 2.7 2.8 2.9 2.10 2.11 2.12 2.13 Les polymérases DNA polymérase (réaction) DNA polymérase (exonucléase 3’→5’) DNA polymérase (fonction d’édition) DNA-polymérases (tableau) DNA pol I (E. Coli) Fragment de Klenow T4 DNA polymérase Sequenase Taq polymérase Reverse transcriptase RNA polymérase II (réaction) RNA polymérases (phages) Poly(A) polymérase Chapitre 3 : 3.1 3.2 3.3 3.4 Les ligases DNA ligase (réaction) DNA ligase (E. Coli) DNA ligase (phage T4) RNA ligase (phage T4) Chapitre

digoxygénine par PCR (nptII) Pour réaliser la PCR, on a besoin du mélange réactionnel suivant : |Constituants du mélange |Concentration initiale |Concentration finale |Volume à prélever (µl) | |Tampon de réaction |10 X |1X |10 | |MgCl2 |25 mM |2.5 mM |10

amplified with these primers by polymerase chain reaction (PCR) with human placenta Marathon-Ready cDNA (Clontech, Palo Alto, CA) used as template. Thermal cycling was accomplished with Advantage cDNA Polymerase Mix (Clontech) at an annealing temperature of 60°C. Reaction products were subcloned and identified as the partial human PAX4 cDNA by sequencing. To isolate the 5 - and 3 -ends of the human PAX4 cDNA, 5 and 3 rapid amplification cDNA ends (RACE) reactions were performed on From the Division of

suivantes servent à confirmer que l’infection par le virus Ebola est bien la cause des symptômes : titrage immunoenzymatique (ELISA) ,tests de détection par capture de l’antigène ,test de séroneutralisation ,transcription inverse suivie d’une réaction en chaîne par polymérase (RT-PCR) ,microscopie électronique ,isolement du virus sur culture cellulaire. La réhydratation de soutien par voie orale ou intraveineuse et le traitement des symptômes spécifiques améliorent les taux de survie. Aucun