Réaction enzymatique

avons déterminé le temps pour lequel la réaction se trouve toujours en vitesse initiale. Durant la première expérience, la réaction était en vitesse initiale durant environ 30 secondes. Or nous ajoutons cette fois un second substrat, le glycérophosphate, qui peut être hydrolysé par la phosphatase alcaline, tout comme le PNPP. Il s’agit donc d’un inhibiteur compétitif du PNPP ce qui ralenti la vitesse de réaction. Ainsi nous avons estimé qu’à 3 minutes la réaction était encore en vitesse initiale. De

son activité, on se servira du calcul de son activité spécifique dans une situation donnée, et de certaines représentations de la vitesse de réaction en fonction de la concentration en substrat, ou en fonction du pH. Principe La Phosphatase alcaline est une enzyme, c’est donc une molécule qui abaisse l’énergie d’activation d’une réaction, ici celle de la réaction d’hydrolyse de la liaison monoester du PNPP. Ce substrat est incolore, et son hydrolyse produit du PNP jaune absorbant à 410 nm. Quand on

années 60, Stratis Avrameas et GB Pierce mettent au point la technique d'immunoenzymologie, technique d'analyse par réaction entre antigènes et anticorps et utilisant comme marqueur des enzymes. Principe: La technique ELISA (Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay) est une technique immuno-enzymatique de détection qui permet  de visualiser une réaction antigène-anticorps grâce à une réaction colorée produite par l'action sur un substrat d'une enzyme préalablement fixée à l'anticorps. Avantages de la technique:

en μM/min. On voit que plus la concentration en substrat est élevée plus le coefficient directeur augmente donc plus la vitesse initiale augmente. L'équation de Michaelis Menten donne la relation entre la vitesse initiale d'une réaction enzymatique et la concentration en substrat: avec vi la vitesse initiale [S] la concentration en substrat donc en PNPP Vm la vitesse maximale qui peut être atteinte que lorsque la concentration en PNPP est saturante

DEPARETEMENT DE BIOLOGIE TRAVAUX DIRIGES DE BIOCHIMIE SV(4) CINETIQUE ENZYMATIQUE 1) Que devient la valeur de la vitesse d’une réaction quand [S]= Km, 2Km, 4Km et nKm? 2) 2. Si la valeur de la vitesse maximale d’une réaction étant de 100 µmol/min et Km avec une valeur de 2mM, quelle sera la valeur de la vitesse de la réaction quand [S]= 2µM et 2M ? en déduire la zone qui délimitera les différents types d’ordre cinétique enzymatique. 3) L’étude de l’activité de la trypsine sur la carbobenzoxylysine

COURBES PURIFICATION D’UNE ENZYME : L’AMYLASE INTRODUCTION Tout d’abord les enzymes sont des protéines jouant un rôle de catalyseur dans les réactions chimiques. Elles accélèrent donc la vitesse de réaction sans en modifier l’équilibre. L’amylase est une enzyme digestive classée comme saccharidase (enzyme qui brise les polysaccharides). Cette enzyme permet la digestion des sucres lents, en transformant l’amidon et le glycogène

Dans certain cas, les réactions peuvent être tellement lentes que l’on doit avoir recours à un catalyseur pour les accélérer et ainsi, pouvoir les mesurer. On donne le nom de « réaction enzymatique » à ces réactions, dont le processus est accéléré par une enzyme. Or, cette expérience enzymologique étudie l’effet que peut avoir la concentration d’enzyme sur la vitesse de la réaction. De plus, on tente d’élucider l’effet du pH sur la réaction ainsi que l’effet de la concentration du substrat. Pour

absorbances à 405 nm. 2. DETERMINATION DES CONSTANTES CINETIQUES DE LA REACTION Opérer comme indiqué dans le tableau ci-dessous : Tube n° 1’ 2’ 3’ 4’ 5’ Solution de PNPP à 1 mmmol.L-1 (en mL) 0,5 0,7 1 2 4 Tampon pH = 9,8 (en mL) 3,5 3,3 3 2 0 Préincuber à 30°C A t = 0 : Solution de phosphatase alcaline préincubée à 30°C (en mL) 1 1 1 1 1 Incuber à 30°C Au bout de 6 minutes exactement : Arrêter la réaction pour chaque tube, par addition rapide et homogénéisation immédiate de

étudiant la vitesse de la réaction au cours du temps puis en étudiant l’influence de la concentration d’enzyme et de substrat sur la cinétique enzymatique de la Trypsine. II.PRINCIPE : La trypsine est une enzyme digestive du suc pancréatique qui a pour but de digérer les protéines. C’est une endonucléase qui hydrolyse les liaisons peptidiques dans lesquelles un acide aminé basique (lysine, arginine) engage sa fonction acide. Son activité enzymatique et son mécanisme d’action

et de déterminer la cinétique de l’enzyme phosphatase alcaline en fonction de la concentration en substrat et de déterminer son pH optimum (pH pour lequel l’enzyme à la vitesse de catalyse la plus rapide). II. Principe. Afin de suivre la réaction enzymatique, réalisation de dosages spectrophotométriques des produits apparus dans le milieu, quand l’enzyme est en présence de son substrat. Pour le dosage, nous allons utiliser comme substrat le P-nitrophénolphosphate (PNPP) qui, après action de l’enzyme